{"id":76494,"date":"2023-12-13T00:00:00","date_gmt":"2023-12-13T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/discover.restek.com\/?p=76494"},"modified":"2026-01-28T22:33:53","modified_gmt":"2026-01-28T22:33:53","slug":"schwankende-retentionszeiten-in-der-lc-durch-ungenugende-aquilibrierung","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/blogs-de\/gnbl5541-de\/schwankende-retentionszeiten-in-der-lc-durch-ungenugende-aquilibrierung","title":{"rendered":"Schwankende Retentionszeiten in der LC durch ungen\u00fcgende \u00c4quilibrierung"},"content":{"rendered":"\n<p><style>     ul li { margin-top: 5px; }     ol li { margin-top: 5px; }  <\/style><\/p>\n\n\n\n<p>Wenn Retentionszeiten in der LC schwanken, d.h. nicht stabil sind, kann das unterschiedliche Ursachen haben wie beispielsweise Unregelm\u00e4\u00dfigkeiten in der Flussrate oder der Gradientenmischung, Temperaturschwankungen, falsch angesetzte Eluenten, usw.<\/p>\n\n\n\n<p>Es kann aber auch an der Methode liegen, haupts\u00e4chlich an der \u00c4quilibrierungszeit im Gradienten.<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Fr\u00fch eluierende Substanzen sind meist st\u00e4rker betroffen als solche, die erst sp\u00e4t im Gradienten eluieren.<\/li>\n\n\n\n<li>Bei isokratischem Arbeiten tritt das Problem naturgem\u00e4\u00df nur bei den ersten L\u00e4ufen auf.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<p>Die Retention ergibt sich durch Wechselwirkungen der Analyten mit der station\u00e4ren Phase. Diese finden im INNEREN der Partikel des S\u00e4ulenmaterials statt. D.h. alle Partikel m\u00fcssen zun\u00e4chst vollst\u00e4ndig mit dem Eluenten gef\u00fcllt und die ganze INNERE Oberfl\u00e4che damit benetzt werden. Das dauert aber seine Zeit, da die Bewegung im Inneren der Partikel ausschlie\u00dflich \u00fcber (die relativ langsamen) Diffusionsprozesse erfolgt.<\/p>\n\n\n\n<p>Wie lange die \u00c4quilibrierungsphase dauert, l\u00e4sst sich nicht allgemein beantworten.<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Das S\u00e4ulentotvolumen ist sicherlich eine wichtige Gr\u00f6\u00dfe.\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Ca. 10 S\u00e4ulentotvolumina sind eine ganz gute Faustregel zum \u00c4quilibrieren.<\/li>\n\n\n\n<li>Exakt berechnen l\u00e4sst sich das S\u00e4ulentotvolumen \u00fcbrigens aus der Totzeit und der Flussrate.<\/li>\n\n\n\n<li>Hier zur Orientierung ungef\u00e4hre Werte f\u00fcr das S\u00e4ulentotvolumen g\u00e4ngiger S\u00e4ulendimensionen.<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<p>&nbsp;<\/p>\n\n\n\n<figure class=\"wp-block-table\"><table class=\"has-fixed-layout\"><tbody><tr><td><strong>S\u00e4ulendimensionen<\/strong><\/td><td><strong>S\u00e4ulen(tot)volumen ungef\u00e4hr<\/strong><\/td><\/tr><tr><td colspan=\"2\">&nbsp;<\/td><\/tr><tr><td>2.0 x 50 mm<\/td><td>0,12 mL<\/td><\/tr><tr><td>2.0 x 100 mm<\/td><td>0,24 mL<\/td><\/tr><tr><td>2.0 x 150 mm<\/td><td>0,35 mL<\/td><\/tr><tr><td colspan=\"2\">&nbsp;<\/td><\/tr><tr><td>3.0 x 50 mm<\/td><td>0,26 mL<\/td><\/tr><tr><td>3.0 x 100 mm<\/td><td>0,53 mL<\/td><\/tr><tr><td>3.0 x 150 mm<\/td><td>0,79 mL<\/td><\/tr><tr><td>3.0 x 250 mm<\/td><td>1,32 mL<\/td><\/tr><tr><td colspan=\"2\">&nbsp;<\/td><\/tr><tr><td>4.6 x 50 mm<\/td><td>0,62 mL<\/td><\/tr><tr><td>4.6 x 100 mm<\/td><td>1,25 mL<\/td><\/tr><tr><td>4.6 x 150 mm<\/td><td>1,87 mL<\/td><\/tr><tr><td>4.6 x 250 mm<\/td><td>3,11 mL<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n<p>&nbsp;<\/p>\n\n\n\n<p>&nbsp;<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Das Totvolumen der Anlage spielt nat\u00fcrlich auch eine Rolle.<\/li>\n\n\n\n<li>Es k\u00f6nnen allerdings auch weniger S\u00e4ulenvolumina notwendig sein zur \u00c4quilibrierung, aber auch bedeutend mehr, denn sie ist auch abh\u00e4ngig vom jeweiligen Mechanismus und dessen Kinetik.\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>RP-Wechselwirkungen sind recht schnell, ionische Wechselwirkungen dagegen langsam.<\/li>\n\n\n\n<li>Im Spezialfall der HILIC-Chromatografie muss sich zun\u00e4chst eine stabile w\u00e4ssrige Schicht auf der polaren station\u00e4ren Phase ausbilden, was ziemlich lange dauern kann.<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<p>\u201e\u00c4quilibrieren\u201c hei\u00dft nicht umsonst \u201eins Gleichgewicht bringen\u201c (Quelle: Duden Online).&nbsp;Also kann eine stabile Retentionszeit der Analyten erst dann erreicht werden, wenn die station\u00e4re Phase komplett mit dem Starteluenten gef\u00fcllt und benetzt ist und station\u00e4re Phase und Eluent sich im Gleichgewicht befinden.<\/p>\n\n\n\n<p>Sollten Sie Probleme mit schwankenden Retentionszeiten im Gradienten haben:<\/p>\n\n\n\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Verl\u00e4ngern Sie einfach die \u00c4quilibrierungszeit mit dem Starteluenten und machen Sie eine Reihe von Injektionen, um zu sehen, ob es einen Effekt hat.<\/li>\n\n\n\n<li>Sp\u00fclen Sie die S\u00e4ule auch mal gr\u00fcndlich mit hohem Gehalt an starkem Eluenten f\u00fcr die jeweilige Methode (z.B. 95% Methanol oder Acetonitril bei RP-Mechanismus).\n<ul class=\"wp-block-list\">\n<li>Das schadet nie und behebt Probleme, die durch die Ansammlung von Matrixbestandteilen auf der S\u00e4ule entstehen, z.B. durch zu geringe Sp\u00fclzeit am Ende des Gradienten.<\/li>\n\n\n\n<li>Dauerhafte Kontamination auf der S\u00e4ule zeigt sich zwar durch kontinuierlich abnehmende Retentionszeiten, aber es k\u00f6nnte auch der Fall auftreten, dass ein Teil des Schmutzes sich im Lauf der Zeit wieder abl\u00f6st. Dann w\u00fcrden die Retentionszeiten kurzzeitig wieder l\u00e4nger werden.<\/li>\n<\/ul>\n<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\n<div style=\"height:100px\" aria-hidden=\"true\" class=\"wp-block-spacer\"><\/div>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Fluctuating retention times in your LC can have various causes including irregularities in the flow rate or gradient mixture, temperature fluctuations, incorrectly prepared eluents, etc. In this blog, we discuss the method as culprit, focusing on equilibration time in the gradient.<\/p>\n","protected":false},"author":58,"featured_media":0,"comment_status":"closed","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"_kad_blocks_custom_css":"","_kad_blocks_head_custom_js":"","_kad_blocks_body_custom_js":"","_kad_blocks_footer_custom_js":"","_kadence_starter_templates_imported_post":false,"_kad_post_transparent":"","_kad_post_title":"","_kad_post_layout":"","_kad_post_sidebar_id":"","_kad_post_content_style":"","_kad_post_vertical_padding":"","_kad_post_feature":"","_kad_post_feature_position":"","_kad_post_header":false,"_kad_post_footer":false,"footnotes":""},"categories":[792],"tags":[],"industries-application":[],"post-badge":[],"resource-type":[],"product-library":[],"resource-technique":[],"ppma_author":[613],"class_list":["post-76494","post","type-post","status-publish","format-standard","hentry","category-blogs-de"],"acf":[],"taxonomy_info":{"category":[{"value":792,"label":"Blogs"}]},"featured_image_src_large":false,"author_info":{"display_name":"Ute Beyer","author_link":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/author\/ute-beyer\/"},"comment_info":0,"category_info":[{"term_id":792,"name":"Blogs","slug":"blogs-de","term_group":0,"term_taxonomy_id":792,"taxonomy":"category","description":"","parent":0,"count":438,"filter":"raw","cat_ID":792,"category_count":438,"category_description":"","cat_name":"Blogs","category_nicename":"blogs-de","category_parent":0}],"tag_info":false,"authors":[{"term_id":613,"user_id":58,"is_guest":0,"slug":"ute-beyer","display_name":"Ute Beyer","avatar_url":"https:\/\/secure.gravatar.com\/avatar\/?s=96&d=mm&r=g","0":null,"1":"","2":"","3":"","4":"","5":"","6":"","7":"","8":""}],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/76494","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/users\/58"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=76494"}],"version-history":[{"count":3,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/76494\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":85807,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/76494\/revisions\/85807"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=76494"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=76494"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=76494"},{"taxonomy":"industries-application","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/industries-application?post=76494"},{"taxonomy":"post-badge","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/post-badge?post=76494"},{"taxonomy":"resource-type","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/resource-type?post=76494"},{"taxonomy":"product-library","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/product-library?post=76494"},{"taxonomy":"resource-technique","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/resource-technique?post=76494"},{"taxonomy":"author","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/de\/wp-json\/wp\/v2\/ppma_author?post=76494"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}