{"id":43349,"date":"2020-10-15T14:30:00","date_gmt":"2020-10-15T14:30:00","guid":{"rendered":"https:\/\/discover.restek.com\/uncategorized\/analyse-lc-msms-du-fentanyl-et-de-ses-analogues-dans-lurine-humaine\/"},"modified":"2026-01-28T19:16:55","modified_gmt":"2026-01-28T19:16:55","slug":"analyse-lc-msms-du-fentanyl-et-de-ses-analogues-dans-lurine-humaine","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/notes-dapplication\/cfan2820-fr\/analyse-lc-msms-du-fentanyl-et-de-ses-analogues-dans-lurine-humaine","title":{"rendered":"Analyse LC-MS\/MS du fentanyl et de ses analogues dans l\u2019urine humaine"},"content":{"rendered":"\n

R\u00e9sum\u00e9<\/h2>\n\n\n\n

Les opio\u00efdes de synth\u00e8se comme le fentanyl et le sufentanil ont des propri\u00e9t\u00e9s analg\u00e9siques tr\u00e8s puissantes. L\u2019abus de ces antalgiques d\u00e9livr\u00e9s sur ordonnance (ainsi que la prolif\u00e9ration rapide des analogues illicites) est un s\u00e9rieux probl\u00e8me de sant\u00e9 publique. Dans cette \u00e9tude, nous avons mis au point une m\u00e9thode simple de type \u00ab Dilute & Shoot \u00bb, qui fournit, sur une colonne Raptor Biphenyl, une analyse rapide LC-MS\/MS de 3 minutes 30 du fentanyl et des compos\u00e9s associ\u00e9s (norfentanyl, ac\u00e9tylfentanyl, alfentanil, butyryl fentanyl, carfentanil, r\u00e9mifentanil et sufentanil) dans l\u2019urine humaine.<\/p>\n\n\n\n

Introduction<\/h2>\n\n\n\n

Ces derni\u00e8res ann\u00e9es, l\u2019usage illicite d\u2019opio\u00efdes de synth\u00e8se a fortement augment\u00e9 et tous les pays font maintenant face \u00e0 une v\u00e9ritable \u00e9pid\u00e9mie. Parmi les milliers d\u2019overdoses mortelles dues aux opio\u00efdes de synth\u00e8se, la majorit\u00e9 est li\u00e9e au fentanyl et ses analogues. Du fait de leurs propri\u00e9t\u00e9s analg\u00e9siques puissantes, les opio\u00efdes de synth\u00e8se comme le fentanyl, l\u2019alfentanil, le r\u00e9mifentanil et le sufentanil sont de puissants antalgiques aux applications m\u00e9dicales l\u00e9gitimes. Cependant, ils sont aussi extr\u00eamement addictifs et font l’objet de nombreux abus. Par exemple, le carfentanil est un puissant anesth\u00e9siant utilis\u00e9 comme tranquillisant pour les animaux de grande taille, notamment les \u00e9l\u00e9phants. Il est dix mille fois plus puissant que la morphine, ce qui en fait l’un des opio\u00efdes de synth\u00e8se les plus puissants sur le march\u00e9. L\u2019augmentation de son usage illicite, la plupart du temps m\u00e9lang\u00e9 \u00e0 de l\u2019h\u00e9ro\u00efne, a \u00e9t\u00e9 reli\u00e9e \u00e0 un nombre consid\u00e9rable de d\u00e9c\u00e8s par overdose depuis 2016. En plus de l\u2019abus de ces m\u00e9dicaments d\u00e9livr\u00e9s sur ordonnance, l\u2019actuelle crise des opio\u00efdes est aliment\u00e9e par la prolif\u00e9ration des analogues illicites comme l\u2019ac\u00e9tylfentanyl et le butyryl fentanyl, qui ont \u00e9t\u00e9 con\u00e7us sp\u00e9cifiquement pour contourner les contr\u00f4les et les poursuites des autorit\u00e9s de lutte contre les stup\u00e9fiants.<\/p>\n\n\n\n

L\u2019augmentation du nombre d\u2019opio\u00efdes et des d\u00e9c\u00e8s associ\u00e9s s\u2019accompagne donc du besoin grandissant d\u2019une m\u00e9thode rapide et pr\u00e9cise permettant d\u2019analyser simultan\u00e9ment le fentanyl et ses analogues. C\u2019est pourquoi nous avons mis au point cette m\u00e9thode d\u2019analyse LC-MS\/MS qui permet de mesurer le fentanyl, six analogues et un m\u00e9tabolite (le norfentanyl) dans l\u2019urine humaine (figure 1). Une proc\u00e9dure de pr\u00e9paration simple de type \u00ab Dilute & Shoot \u00bb est associ\u00e9e \u00e0 une analyse chromatographique rapide (3 minutes 30) sur une colonne Raptor Biphenyl. Cette m\u00e9thode permet d\u2019identifier et de quantifier le fentanyl et les compos\u00e9s associ\u00e9s de mani\u00e8re exacte et pr\u00e9cise, ce qui la rend ad\u00e9quate pour diverses applications comme les analyses de toxicologie clinique, les analyses m\u00e9dico-l\u00e9gales, les d\u00e9pistages sur le lieu de travail ou encore la recherche pharmaceutique.<\/p>\n\n\n

Figure 1 :<\/strong>\u00a0Structures chimiques<\/div>
\n\n
\"\"<\/figure>\n\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n

Caract\u00e9ristiques exp\u00e9rimentales<\/h2>\n\n\n\n

Pr\u00e9paration des \u00e9chantillons<\/h3>\n\n\n\n

Les analytes ont \u00e9t\u00e9 ajout\u00e9s dans un \u00ab pool \u00bb d\u2019urine humaine. Un aliquot de 80 \u03bcl d\u2019urine a \u00e9t\u00e9 m\u00e9lang\u00e9 avec 320 \u03bcl d’une solution eau:m\u00e9thanol 70:30 (dilution de facteur 5) et 10 \u03bcl d\u2019\u00e9talon interne (40 ng\/ml dans le m\u00e9thanol), dans un flacon filtrant Thomson SINGLE StEP (r\u00e9f. Restek # 25895<\/strong>). Apr\u00e8s filtration sur membrane PVDF de 0,2 \u03bcm, 5 \u03bcl ont \u00e9t\u00e9 inject\u00e9s dans le syst\u00e8me LC-MS\/MS.<\/p>\n\n\n\n

Solutions \u00e9talons et \u00e9chantillons de contr\u00f4le qualit\u00e9 (QC)<\/h3>\n\n\n\n

Les solutions \u00e9talons ont \u00e9t\u00e9 pr\u00e9par\u00e9es dans un \u00ab pool \u00bb d\u2019urine humaine \u00e0 des concentrations de 0.05, 0.10, 0.25, 0.50, 1.00, 2.50, 5.00, 10.0, 25.0 et 50.0 ng\/ml. Trois niveaux d’\u00e9chantillons QC (0.75, 4.0 et 20 ng\/ml) ont \u00e9t\u00e9 pr\u00e9par\u00e9s dans l\u2019urine pour tester l\u2019exactitude et la pr\u00e9cision en comparant aux courbes de calibration. Les analyses ont \u00e9t\u00e9 r\u00e9alis\u00e9es sur trois jours diff\u00e9rents. Tous les standards et les \u00e9chantillons QC ont \u00e9t\u00e9 soumis \u00e0 la proc\u00e9dure de pr\u00e9paration des \u00e9chantillons d\u00e9crite ci-dessus.<\/p>\n\n\n\n

L\u2019analyse LC-MS\/MS du fentanyl et de ses analogues a \u00e9t\u00e9 r\u00e9alis\u00e9e sur un instrument ACQUITY UPLC coupl\u00e9 \u00e0 un spectrom\u00e8tre de masse Waters Xevo TQ-S. Les conditions instrumentales sont d\u00e9crites ci-dessous et les transitions des analytes sont fournies dans le Tableau I.<\/p>\n\n\n

\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n\n
Colonne analytique :<\/td>\nRaptor Biphenyl (5 \u00b5m, 50 mm x 2.1 mm;\u00a0r\u00e9f.\u00a0# 9309552<\/strong>)<\/td>\n<\/tr>\n
Pr\u00e9colonne\u00a0:<\/td>\nCartouche Raptor Biphenyl EXP, (5 \u00b5m, 5 mm x 2.1 mm;\u00a0r\u00e9f.\u00a0#<\/strong>\u00a0930950252<\/strong>)<\/td>\n<\/tr>\n
Phase mobile A :<\/td>\n0.1% d\u2019acide formique dans l\u2019eau<\/td>\n<\/tr>\n
Phase mobile B :<\/td>\n0.1% d\u2019acide formique dans le m\u00e9thanol<\/td>\n<\/tr>\n
Gradient<\/td>\nTemps\u00a0(min)<\/td>\n%B<\/td>\n<\/tr>\n
\u00a0<\/td>\n0.00<\/td>\n30<\/td>\n<\/tr>\n
\u00a0<\/td>\n2.50<\/td>\n70<\/td>\n<\/tr>\n
\u00a0<\/td>\n2.51<\/td>\n30<\/td>\n<\/tr>\n
\u00a0<\/td>\n3.50<\/td>\n30<\/td>\n<\/tr>\n
D\u00e9bit :<\/td>\n0.4 mL\/min<\/td>\n<\/tr>\n
Volume d’injection :<\/td>\n5 \u00b5L<\/td>\n<\/tr>\n
Temp\u00e9rature :<\/td>\n40 \u00b0C<\/td>\n<\/tr>\n
Mode d’ionisation :<\/td>\nESI+<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<\/figure>\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n

Table I :<\/strong> Transitions ioniques<\/p>\n\n\n\n

Analyte<\/strong><\/th>Ion pr\u00e9curseur<\/strong><\/th>Qantificateur des ions
produits<\/strong><\/th>		Qantificateur des ions
produits<\/strong><\/th>		\u00c9talon interne<\/strong><\/th><\/tr><\/thead>
Norfentanyl<\/td>233.27<\/td>84.15<\/td>56.06<\/td>Norfentanyl-D5<\/sub><\/td><\/tr>
Ac\u00e9tylfentanyl<\/td>323.37<\/td>188.25<\/td>105.15<\/td>Ac\u00e9tylfentanyl-13<\/sup>C6<\/sub><\/td><\/tr>
Fentanyl<\/td>337.37<\/td>188.26<\/td>105.08<\/td>Fentanyl-D5<\/sub><\/td><\/tr>
Butyryl fentanyl<\/td>351.43<\/td>188.20<\/td>105.15<\/td>Carfentanil-D5<\/sub><\/td><\/tr>
R\u00e9mifentanil<\/td>377.37<\/td>113.15<\/td>317.30<\/td>Norfentanyl-D5<\/sub><\/td><\/tr>
Sufentanil<\/td>387.40<\/td>238.19<\/td>111.06<\/td>Sufentanil-D5<\/sub><\/td><\/tr>
Carfentanil<\/td>395.40<\/td>113.14<\/td>335.35<\/td>Carfentanil-D5<\/sub><\/td><\/tr>
Alfentanil<\/td>417.47<\/td>268.31<\/td>197.23<\/td>Ac\u00e9tylfentanyl-13<\/sup>C6<\/sub><\/td><\/tr>
Norfentanyl-D5<\/sub><\/td>238.30<\/td>84.15<\/td>\u2014<\/td>\u2014<\/td><\/tr>
Ac\u00e9tylfentanyl-13<\/sup>C6<\/sub><\/td>329.37<\/td>188.25<\/td>\u2014<\/td>\u2014<\/td><\/tr>
Fentanyl-D5<\/sub><\/td>342.47<\/td>188.27<\/td>\u2014<\/td>\u2014<\/td><\/tr>
Sufentanil-D5<\/sub><\/td>392.40<\/td>238.25<\/td>\u2014<\/td>\u2014<\/td><\/tr>
Carfentanil-D5<\/sub><\/td>400.40<\/td>340.41<\/td>\u2014<\/td>\u2014<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

R\u00e9sultats and Discussion<\/h2>\n\n\n\n

Performances chromatographiques<\/h3>\n\n\n\n

Les huit analytes ont tous \u00e9t\u00e9 s\u00e9par\u00e9s au cours d\u2019une analyse en gradient de 2 minutes 30 (dur\u00e9e totale du cycle d\u2019analyse : 3 minutes 30) sur une colonne Raptor Biphenyl (Figure 2). Aucune interf\u00e9rence significative de la matrice pouvant avoir un impact n\u00e9gatif sur la quantification des \u00e9chantillons d\u2019urine (dilu\u00e9s avec un facteur 5) n\u2019a \u00e9t\u00e9 observ\u00e9e. La colonne Raptor Biphenyl utilis\u00e9e est une colonne de silice \u00e0 particules superficiellement poreuses (\u00ab SPP \u00bb) de 5 \u03bcm. Elle a \u00e9t\u00e9 choisie pour cette m\u00e9thode, car elle offre des performances semblables aux colonnes de silice \u00e0 particules compl\u00e8tement poreuses (\u00ab FPP \u00bb) de plus petite granulom\u00e9trie, tout en g\u00e9n\u00e9rant moins de contrepression dans le syst\u00e8me.<\/p>\n\n\n

Figure 2 :<\/strong>\u00a0La colonne Raptor Biphenyl s\u00e9pare efficacement tous les compos\u00e9s cibles pr\u00e9sents dans l\u2019urine, sans interf\u00e9rence apparente de la matrice.<\/div>
\n\n

Echantillon blanc d’urine\u00a0<\/strong><\/p>\n\n\n

\"Blank<\/div>

LC_CF0716<\/p>

Related SKUs<\/h4>