Les pipettes \u00e0 d\u00e9placement d\u2019air sont sensibles \u00e0 la pression de vapeur du liquide mesur\u00e9. Elles sont habituellement \u00e9talonn\u00e9es avec de l\u2019eau, donc si vous utilisez des pipettes \u00e0 d\u00e9placement d\u2019air pour mesurer le volume d\u2019un liquide ayant une pression de vapeur sup\u00e9rieure ou inf\u00e9rieure, le volume sera diff\u00e9rent de ce qu’indique la pipette. Si vous avez besoin d\u2019un volume exact et pr\u00e9cis d\u2019un liquide ayant une pression de vapeur diff\u00e9rente de l\u2019eau, choisissez une pipette \u00e0 d\u00e9placement positif ou n\u2019oubliez pas de compenser la diff\u00e9rence en \u00e9talonnant votre pipette \u00e0 d\u00e9placement d\u2019air avec un gravim\u00e8tre pour obtenir les param\u00e8tres appropri\u00e9s pour le liquide concern\u00e9.<\/li>\n\n\n\n
Les pipettes manuelles exigent de la r\u00e9gularit\u00e9 de la part de l\u2019utilisateur. Il est essentiel de r\u00e9gler le volume de la pipette et de faire en sorte qu\u2019il ne varie pas d\u2019une aliquote \u00e0 l\u2019autre pour obtenir des r\u00e9sultats homog\u00e8nes car la moindre rotation ou le moindre sursaut peuvent suffire \u00e0 modifier le r\u00e9glage du volume. Il est \u00e9galement n\u00e9cessaire d\u2019appliquer toujours la m\u00eame pression sur le piston aux points de r\u00e9sistance, lors de l\u2019aspiration et de la distribution des fluides. Les pipettes \u00e9lectroniques sont moins sujettes \u00e0 la “d\u00e9rive” pendant la manipulation mais elles imposent le rythme de travail et l\u2019utilisateur doit suivre leur cadence.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n
![\"\"](\"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/\/figure-article-GNAR3169-01-a-1024x723.jpg\" "\\"-\\"")
![\"\"](\"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/\/figure-article-GNAR3169-01-b-1024x723.jpg\" "\\"-\\"")
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- Types d\u2019embouts
Il est extr\u00eamement important que le type d\u2019embout corresponde au type de pipette. Le fait qu\u2019un embout se raccorde \u00e0 une pipette donn\u00e9e n\u2019implique pas forc\u00e9ment qu\u2019il s\u2019agisse de l\u2019embout ad\u00e9quat. Les embouts ont g\u00e9n\u00e9ralement un code de couleurs mais il est toujours utile de v\u00e9rifier que le type d\u2019embout correspond \u00e0 la pipette.<\/li>\n\n\n\n - \u00c9talonnage
Les pipettes ne restent pas \u00e9talonn\u00e9es ind\u00e9finiment. Elles doivent \u00eatre \u00e9talonn\u00e9es r\u00e9guli\u00e8rement par un professionnel en fonction des besoins ou des exigences de chaque laboratoire, et conform\u00e9ment au programme de gestion de la qualit\u00e9 de chaque organisme. Il est toujours utile de v\u00e9rifier l’\u00e9talonnage de la pipette avec de l\u2019eau et un gravim\u00e8tre avant l’utilisation.<\/li>\n\n\n\n - Mouillage de l\u2019embout
Les pipettes \u00e0 d\u00e9placement positif ont tendance \u00e0 emprisonner des bulles d\u2019air lors de leur premier remplissage. Il peut donc \u00eatre utile de les vider et de les remplir plusieurs fois avant l\u2019utilisation pour \u00e9vacuer les bulles qui modifient le volume distribu\u00e9. En outre, en raison d\u2019un effet de mouillage, les embouts des pipettes \u00e0 d\u00e9placement d\u2019air peuvent pr\u00e9senter un volume l\u00e9g\u00e8rement diff\u00e9rent lors du premier remplissage par rapport aux mesures suivantes. Il est donc n\u00e9cessaire d\u2019\u00eatre r\u00e9gulier dans la technique.<\/li>\n\n\n\n - Technique de pipetage
La plupart du temps, les embout de pipettes doivent \u00eatre plac\u00e9s juste en dessous de la surface du liquide. Si la pipette est ins\u00e9r\u00e9e trop profond\u00e9ment dans le liquide, un peu de fluide suppl\u00e9mentaire peut entrer dans la pipette avant l\u2019aspiration, augmentant ainsi le volume mesur\u00e9. La pipette doit toujours \u00eatre maintenue perpendiculairement \u00e0 la surface du liquide, sans former d\u2019angle. Lors d\u2019une \u00e9tude interne o\u00f9 nous avons compar\u00e9 la bonne et la mauvaise technique de pipetage, la mauvaise technique de pipetage entra\u00eenait un \u00e9cart type neuf fois sup\u00e9rieur (Figure 2).<\/li>\n<\/ul>\n\n\nFigure 2 :<\/strong>\u00a0R\u00e9duire les erreurs au minimum en utilisant la bonne technique de pipetage : l\u2019embout doit toujours \u00eatre maintenu perpendiculairement et juste en dessous de la surface du liquide. Tout positionnement angulaire ou plus profond sous la surface peut g\u00e9n\u00e9rer des volumes inexacts.<\/div>\n\n\n\n![\"\"](\"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/\/figure-article-GNAR3169-02-a-1024x723.jpg\" "\\"-\\"")
<\/figure>\n<\/div>\n\n\n\n\n![\"\"](\"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/\/figure-article-GNAR3169-02-b-1024x723.jpg\" "\\"-\\"")
<\/figure>\n<\/div>\n<\/div>\n\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n<\/div>\n\n\n\n- \n
- Remplacement de l’embout de la pipette
La plupart du temps, les embouts de pipettes doivent \u00eatre remplac\u00e9s apr\u00e8s chaque utilisation car leur r\u00e9utilisation peut introduire des contaminants dans les mesures suivantes. Si vous pensez que l\u2019embout peut avoir \u00e9t\u00e9 contamin\u00e9, jetez-le.<\/li>\n\n\n\n - Plage de volumes
Il est pr\u00e9f\u00e9rable d\u2019\u00e9viter l\u2019extr\u00e9mit\u00e9 basse de la plage de volumes de la pipette pour r\u00e9duire les risques d\u2019erreur. Choisir \u00e9galement la pipette dont la plage est la plus proche du volume \u00e0 distribuer. Par exemple, si vous devez distribuer 10 \u03bcl et que vous avez le choix entre une pipette de 1 \u00e0 10 \u03bcl et une de 10 \u00e0 100 \u03bcl, choisissez la pipette de 1 \u00e0 10 \u03bcl car la marge d\u2019erreur de cette pipette est normalement inf\u00e9rieure \u00e0 celle de la plus grande pipette pour une aliquote de 10 \u03bcl.<\/li>\n\n\n\n - \u00c9viter de distribuer de tr\u00e8s faibles volumes pour les solutions concentr\u00e9es
Si une solution-m\u00e8re concentr\u00e9e est dilu\u00e9e pour atteindre les diff\u00e9rents niveaux d’\u00e9talonnage et que les volumes n\u00e9cessaires pour obtenir des \u00e9talons faiblement concentr\u00e9s sont tr\u00e8s faibles, la confection d\u2019une solution interm\u00e9diaire permet de diluer une plus grande aliquote afin d\u2019obtenir les solutions-\u00e9talons les moins concentr\u00e9es.<\/li>\n<\/ul>\n\n\n\nQuels autres mat\u00e9riels de laboratoire sont r\u00e9guli\u00e8rement utilis\u00e9s pour pr\u00e9parer les solutions \u00e9talons de courbes d’\u00e9talonnage ? Les agitateurs-m\u00e9langeurs vortex et les bains \u00e0 ultrasons sont fr\u00e9quemment employ\u00e9s pour m\u00e9langer les \u00e9talons. Mais pour garantir l\u2019homog\u00e9n\u00e9it\u00e9, ils doivent \u00eatre utilis\u00e9s correctement. Par exemple, avec un agitateur-m\u00e9langeur vortex, l\u2019espace \u00e0 l\u2019int\u00e9rieur du flacon doit \u00eatre suffisant pour que la solution se m\u00e9lange efficacement. La formation d\u2019un petit tourbillon dans le liquide indique que l\u2019espace est suffisant pour que le m\u00e9lange soit optimal. Le m\u00e9lange peut aussi \u00eatre secou\u00e9 ou pass\u00e9 aux ultrasons mais le processus est plus long. Attention, les compos\u00e9s thermiquement labiles peuvent se d\u00e9grader dans un bain \u00e0 ultrasons car la solution peut chauffer pendant la sonication. Si vous avez des questions concernant le mat\u00e9riel, consultez vos coll\u00e8gues, les manuels, les ressources en ligne ou les vendeurs d\u2019instruments pour obtenir les r\u00e9ponses et apprendre \u00e0 utiliser correctement le mat\u00e9riel n\u00e9cessaire pour pr\u00e9parer les solutions \u00e9talons.<\/p>\n\n\n\n
Tenir compte des probl\u00e8mes de stabilit\u00e9<\/h3>\n\n\n\n
Pour pr\u00e9parer des solutions \u00e9talons de travail, les produits de d\u00e9part utilis\u00e9s doivent toujours \u00eatre de grande qualit\u00e9 et formul\u00e9s de mani\u00e8re \u00e0 garantir la stabilit\u00e9. Sur le site internet Restek, vous trouverez facilement des solutions-m\u00e8res stables et des m\u00e9langes sur mesure sp\u00e9cifiques pour votre liste d\u2019analytes cibles. Certains fabricants d’\u00e9talons de r\u00e9f\u00e9rence, comme Restek, obtiennent la certification ISO<\/a> pour confirmer que des proc\u00e9dures sont en place pour garantir que la concentration indiqu\u00e9e sur l\u2019\u00e9tiquette soit exacte jusqu\u2019\u00e0 la date d\u2019expiration du produit (dans la mesure o\u00f9 il est conserv\u00e9 et manipul\u00e9 conform\u00e9ment aux instructions de l’\u00e9tiquette).<\/p>\n\n\n\n
Toutefois, lorsqu\u2019un \u00e9talon est ouvert et m\u00e9lang\u00e9 avec d\u2019autres \u00e9talons ou avec des solvants, des r\u00e9actions chimiques peuvent se produire au fil du temps et provoquer une d\u00e9gradation qui r\u00e9duit l\u2019homog\u00e9n\u00e9it\u00e9 des \u00e9talons pr\u00e9par\u00e9s au fil des jours ou m\u00eame des heures. La Figure 3 montre comment la carboxine, un pesticide dont la formule est stable en solution-m\u00e8re au moment de l\u2019achat, peut se d\u00e9grader au fil du temps lorsqu\u2019elle est m\u00e9lang\u00e9e pour faire une solution \u00e9talon pour l\u2019analyse de pesticides multi-r\u00e9sidus.<\/p>\n\n\n\n
La sensibilit\u00e9 \u00e0 la temp\u00e9rature ou \u00e0 la lumi\u00e8re doit \u00e9galement \u00eatre prise en compte, surtout pour la conservation. Il est indispensable de savoir combien de temps les nouveaux m\u00e9langes restent stables, afin d\u2019\u00eatre s\u00fbr d’avoir des courbes d’\u00e9talonnage exactes lorsqu\u2019ils seront utilis\u00e9s. Des \u00e9tudes de stabilit\u00e9 doivent \u00eatre r\u00e9alis\u00e9es \u00e0 l\u2019avance pour savoir exactement comment les \u00e9talons de travail doivent \u00eatre conserv\u00e9s et manipul\u00e9s, et pendant combien de temps ils donneront des r\u00e9sultats quantitatifs pr\u00e9cis et exacts. Attention, des concentrations diff\u00e9rentes peuvent entrainer des vitesses de d\u00e9gradation diff\u00e9rentes.<\/p>\n\n\n
Figure 3 :<\/strong>\u00a0D\u00e9gradation de la carboxine dans une solution \u00e9talon pr\u00e9par\u00e9e pour l\u2019analyse de pesticides multi-r\u00e9sidus (concentration de d\u00e9part : 1 ppb).<\/div>\n\n![\"\"](\"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/\/figure-article-GNAR3169-03-1024x538.jpg\" "\\"-\\"")
<\/figure>\n<\/div>\n\n\nLa carboxine est pr\u00e9sente dans une solution \u00e9talon de 30 compos\u00e9s pour l\u2019analyse des pesticides (r\u00e9f. 31976), qui fait partie d\u2019un kit de 10 ampoules pour l\u2019analyse par LC de pesticide multi-r\u00e9sidus contenant 204 analytes (r\u00e9f. 31971), o\u00f9 chaque ampoule contient une solution formul\u00e9e sp\u00e9cifiquement et group\u00e9e en vue d\u2019une stabilit\u00e9 maximale \u00e0 long terme. Un m\u00e9lange de calibration de 1\u2009ppb contenant tous les composants du kit a \u00e9t\u00e9 pr\u00e9par\u00e9 dans de l\u2019extrait aqueux de c\u00e9leri et de l\u2019ac\u00e9tonitrile (90:10) pour illustrer l\u2019importance de tester les composants individuels des m\u00e9langes de calibration complexes au fil du temps.<\/em><\/p>\n\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n
En plus de la stabilit\u00e9, la solubilit\u00e9 des analytes peut poser probl\u00e8me. Si certains compos\u00e9s ne sont pas assez solubles dans le solvant de dilution cela peut entra\u00eener de s\u00e9rieux probl\u00e8mes d\u2019\u00e9talonnage. Les propri\u00e9t\u00e9s chimiques des analytes doivent \u00eatre v\u00e9rifi\u00e9es pour confirmer que les compos\u00e9s et leurs diverses concentrations d’\u00e9talonnage seront \u00e0 la fois solubles et stables dans les solutions pr\u00e9par\u00e9es.<\/p>\n\n\n\n
Mettre en place un mode op\u00e9ratoire s\u00fbr<\/h3>\n\n\n\n
Le fait de r\u00e9diger un mode op\u00e9ratoire avant de pr\u00e9parer les solutions \u00e9talons pour les courbes d’\u00e9talonnage permet de travailler plus efficacement au laboratoire. L\u2019utilisation d\u2019un tableur contenant les volumes et les concentrations pr\u00e9-calcul\u00e9s pour documenter les \u00e9tapes du mode op\u00e9ratoire est une bonne pratique qui permet de ne pas oublier d’\u00e9tape ni d\u2019ajouter de quantit\u00e9s erron\u00e9es. C\u2019est une bonne mani\u00e8re de planifier \u00e0 l\u2019avance les quantit\u00e9s n\u00e9cessaires de substances chimiques et de solvants, et d\u2019imaginer la proc\u00e9dure avant de l\u2019ex\u00e9cuter.<\/p>\n\n\n\n
L\u2019ajout d\u2019un tableur avec un code de couleurs au mode op\u00e9ratoire permet de fournir facilement un niveau de s\u00e9curit\u00e9 suppl\u00e9mentaire. Utiliser les couleurs pour relier entre eux les mat\u00e9riaux de r\u00e9f\u00e9rence, les solutions-m\u00e8res concentr\u00e9es et les \u00e9talons termin\u00e9s aux diff\u00e9rents niveaux de concentration. Il est facile de se tromper de flacon ou d\u2019ampoule lorsqu\u2019ils se ressemblent tous. Si les couleurs des cellules du tableur correspondent aux \u00e9tiquettes ou aux capuchons utilis\u00e9s dans le laboratoire, les risques d\u2019erreur sont r\u00e9duits au minimum. Lorsque le mode op\u00e9ratoire est pr\u00eat, il suffit de l\u2019imprimer, de l\u2019apporter au laboratoire et de le garder devant soi pendant que l\u2019on travaille (Figure 4).<\/p>\n\n\n
Figure 4 :<\/strong>\u00a0L\u2019utilisation d\u2019un mode op\u00e9ratoire pr\u00e9-calcul\u00e9 avec un code de couleurs pour la pr\u00e9paration des solutions \u00e9talons de calibration, et la manipulation des flacons dans un portoir permettent de suivre la progression des \u00e9tapes pour \u00e9viter les erreurs co\u00fbteuses.<\/div>\n\n![\"\"](\"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/\/figure-article-GNAR3169-04-1024x525.jpg\" "\\"-\\"")
<\/figure>\n<\/div>\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\nAu moment de commencer \u00e0 travailler au laboratoire, v\u00e9rifier toutes les quantit\u00e9s de substances chimiques, de solvants et de fournitures pour s\u2019assurer que tout est pr\u00e9sent en quantit\u00e9 suffisante. Ensuite, il suffit de suivre le mode op\u00e9ratoire cr\u00e9\u00e9 pr\u00e9c\u00e9demment. \u00c0 chaque \u00e9tape, il est recommand\u00e9 d\u2019int\u00e9grer un syst\u00e8me permettant de garder une trace du travail r\u00e9alis\u00e9. Par exemple, il peut s\u2019agir de fabriquer 10 niveaux d’\u00e9talonnage ou plus, contenant chacun diff\u00e9rents mat\u00e9riaux de r\u00e9f\u00e9rence, solutions-m\u00e8res, diluants et\/ou \u00e9talons internes. Dans ce cas, il est tr\u00e8s utile de travailler avec un portoir car cela permet de d\u00e9placer les flacons dans une nouvelle rang\u00e9e \u00e0 chaque \u00e9tape termin\u00e9e, afin de savoir o\u00f9 en est la proc\u00e9dure. Les questions des coll\u00e8gues, les appels t\u00e9l\u00e9phoniques, etc. sont autant de sources d\u2019interruption ou de distraction qui peuvent faire oublier o\u00f9 l\u2019on s\u2019est arr\u00eat\u00e9. L\u2019utilisation d\u2019un code de couleurs et une routine qui mat\u00e9rialise la progression aident \u00e9norm\u00e9ment \u00e0 \u00e9viter d\u2019ajouter le mauvais \u00e9talon dans le mauvais niveau d\u2019\u00e9talonnage ou m\u00eame d\u2019oublier une \u00e9tape par accident.<\/p>\n\n\n\n
En bref, lors de la pr\u00e9paration des solutions \u00e9talons pour les courbes d’\u00e9talonnage, il est essentiel de r\u00e9duire les sources d\u2019erreurs au minimum pour obtenir une quantification exacte. En faisant attention aux strat\u00e9gies abord\u00e9es ici (et en posant des questions si n\u00e9cessaire), il est possible d’\u00e9viter les probl\u00e8mes et d\u2019obtenir de bons r\u00e9sultats. Le temps pass\u00e9 \u00e0 se familiariser avec le mat\u00e9riel et \u00e0 acqu\u00e9rir la technique ad\u00e9quate, \u00e0 comprendre les limites de stabilit\u00e9 et de solubilit\u00e9 et \u00e0 mettre au point un mode op\u00e9ratoire s\u00fbr est un bon investissement qui am\u00e9liorera l’exactitude des r\u00e9sultats analytiques.
Vous souhaitez plus d’informations ? Voici tout ce que vous devez savoir\u00a0\u00e0 propos de nos \u00e9talons de r\u00e9f\u00e9rence<\/a>.<\/p>\n\n\n\n<\/div>\n\n\n\nProducts Mentioned<\/h3>\n
\n\n\n\n Catalog No. 31976 <\/a> <\/div>\n\nSolution-\u00e9talon de pesticides multi-r\u00e9sidus pour LC n\u00b05, compos\u00e9s organo-azot\u00e9s, 100\u00a0\u00b5g\/ml, ac\u00e9tonitrile, ampoule de 1\u00a0ml<\/div>\n <\/div>\n
- Remplacement de l’embout de la pipette