{"id":43692,"date":"2021-01-11T00:00:00","date_gmt":"2021-01-11T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/discover.restek.com\/uncategorized\/transfert-de-methodes-lc-un-changement-de-dimensions-de-colonne-va-t-il-accelerer-mes-analyses\/"},"modified":"2026-01-28T21:51:53","modified_gmt":"2026-01-28T21:51:53","slug":"transfert-de-methodes-lc-un-changement-de-dimensions-de-colonne-va-t-il-accelerer-mes-analyses","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/articles-fr\/gnar3316-fr\/transfert-de-methodes-lc-un-changement-de-dimensions-de-colonne-va-t-il-accelerer-mes-analyses","title":{"rendered":"Transfert de M\u00e9thodes LC : un changement de dimensions de colonne va-t-il acc\u00e9l\u00e9rer mes analyses ?"},"content":{"rendered":"\n

Introduction<\/h2>\n\n\n\n

Le transfert de m\u00e9thodes est un moyen efficace pour am\u00e9liorer les m\u00e9thodes de chromatographie liquide (LC), en \u00e9conomisant du temps, du solvant et des \u00e9chantillons. Lors d\u2019un transfert de m\u00e9thodes, vous devez garder le m\u00eame type de particules (par exemple SPP Raptor) et la m\u00eame chimie de phase stationnaire (par exemple Biphenyl), mais il est possible qu\u2019en utilisant une colonne plus courte, avec un diam\u00e8tre interne plus faible et des particules plus petites, vous arriviez \u00e0 augmenter votre cadence d\u2019analyses tout en maintenant vos performances chromatographiques. Et la cadence d\u2019analyses n\u2019est qu\u2019un seul des avantages potentiels d\u2019un transfert de m\u00e9thodes, \u00e0 laquelle on peut ajouter plus de temps pour les maintenances de routine ou d\u2019autres avantages li\u00e9s \u00e0 des m\u00e9thodes plus rapides, tel que l\u2019\u00e9conomie de solvant par exemple.<\/p>\n\n\n\n

Mais seulement changer la colonne peut ne pas suffire, en particulier dans les cas o\u00f9 la s\u00e9paration et la r\u00e9solution de paires critiques sont essentielles. Vous devez modifier les conditions de la m\u00e9thode afin qu\u2019elles correspondent \u00e0 la nouvelle colonne pour ne pas perdre en r\u00e9solution, et c\u2019est l\u00e0 que les logiciels de transfert de m\u00e9thodes entrent en jeu.<\/p>\n\n\n\n

Pour obtenir une s\u00e9paration similaire sur un temps d\u2019analyse plus court, vous devez changer votre colonne pour une colonne avec de plus petites dimensions, tout en maintenant la m\u00eame efficacit\u00e9 (g\u00e9n\u00e9ralement exprim\u00e9e en nombre total de plateaux th\u00e9oriques). Mais il n\u2019est pas toujours simple voire m\u00eame possible de trouver de dimensions de colonne maintenant le m\u00eame nombre de plateaux th\u00e9oriques que la colonne d\u2019origine (plus ou moins 10%). Cela ne veut pas dire qu\u2019un transfert de la m\u00e9thode est impossible ; cela veut simplement dire qu\u2019il y aura des modifications dans votre s\u00e9paration analytique. La nouvelle colonne et la nouvelle m\u00e9thode peuvent encore vous aider \u00e0 atteindre des performances chromatographiques acceptables sur un tems d\u2019analyse plus court donc il vaut la peine de prendre du temps sur le logiciel de transfert de m\u00e9thodes pour explorer toutes les options.<\/p>\n\n\n\n

Voyons maintenant comment utiliser le logiciel de transfert de m\u00e9thodes Restek Pro EZ<\/em>LC<\/a> pour d\u00e9terminer si le transfert de votre m\u00e9thode sur une nouvelle colonne vous fera gagner du temps tout en donnant des r\u00e9sultats fiables de qualit\u00e9.<\/p>\n\n\n\n

Sc\u00e9nario de transfert de m\u00e9thode LC<\/h2>\n\n\n\n

Dans cet exemple, notre laboratoire a d\u00e9velopp\u00e9 avec succ\u00e8s une m\u00e9thode sur une colonne Raptor Biphenyl en 3.0 x 100 mm, 2.7\u00b5m. Nous avions \u00e9galement une colonne en 2.1 x 50 mm, 2.7\u00b5m au laboratoire et, sachant que le passage sur une colonne de plus petites dimensions peut diminuer le temps d\u2019analyse, nous avons donc voulu savoir si nous pouvions transf\u00e9rer notre m\u00e9thode sur cette colonne plus courte au diam\u00e8tre interne plus faible.<\/p>\n\n\n\n

Dans ce cas pr\u00e9cis, la plus petite des deux colonnes pr\u00e9sente une perte importante du nombre de plateaux th\u00e9oriques. Cela signifie que nous devons nous attendre \u00e0 avoir une s\u00e9paration diff\u00e9rente sur un temps d\u2019analyse plus court avec une m\u00e9thode correctement transf\u00e9r\u00e9e, et nous devons donc faire attention \u00e0 ne pas trop compromettre les r\u00e9solutions des paires critiques suite \u00e0 ce transfert de m\u00e9thode LC. Mais, m\u00eame si nous savons que nous n\u2019obtiendrons pas exactement la m\u00eame s\u00e9paration, pourrons-nous tout de m\u00eame obtenir des performances chromatographiques acceptables ?<\/p>\n\n\n\n

Calculer les conditions de la nouvelle m\u00e9thode et pr\u00e9dire les nouveaux r\u00e9sultats est la d\u00e9finition m\u00eame d\u2019un logiciel de transfert de m\u00e9thodes. Voyons donc comment cela fonctionne.<\/p>\n\n\n\n

Exemple de transfert de m\u00e9thode<\/h2>\n\n\n\n

Nous souhaitons transf\u00e9rer l\u2019analyse de certaines drogues sur une colonne de plus petites dimensions pour voir si nous pouvons r\u00e9duire encore davantage notre temps d\u2019analyse mais sans sacrifier les performances chromatographiques de la colonne d\u2019origine, dont nous sommes satisfaits. Sur les 15 mol\u00e9cules, il y a 5 paires de compos\u00e9s isobares qui n\u00e9cessitent d\u2019\u00eatre s\u00e9par\u00e9s chromatographiquement, la MS\/MS n\u2019\u00e9tant pas en mesure de les diff\u00e9rencier. La m\u00e9thode originale permet cette s\u00e9paration chromatographique et nous allons donc nous int\u00e9resser plus particuli\u00e8rement \u00e0 ce point pour la m\u00e9thode transf\u00e9r\u00e9e. La Figure 1 montre les r\u00e9sultats de la m\u00e9thode d\u2019origine sur une colonne en 3.0 x 100 mm, 2.7\u00b5m.<\/p>\n\n\n

Figure 1 :<\/strong>\u00a0R\u00e9sultats chromatographiques sur la colonne et la m\u00e9thode d\u2019origine.<\/div>
\n
\"Original<\/div>

LC_CF0756<\/p>

Peaks<\/h4>\n
<\/th>Peaks<\/th>tR<\/sub> (min)<\/th>Precursor Ion<\/th>Product Ion<\/th><\/tr><\/thead>\n
1.<\/td>Morphine<\/a><\/td>1.11<\/td>286.2<\/td>152.1<\/td><\/tr>\n
2.<\/td>Hydromorphone<\/a><\/td>1.43<\/td>286.2<\/td>184.9<\/td><\/tr>\n
3.<\/td>Norcodeine<\/a><\/td>1.86<\/td>286.1<\/td>151.9<\/td><\/tr>\n
4.<\/td>Norhydrocodone<\/a><\/td>2.49<\/td>286.1<\/td>199.0<\/td><\/tr>\n
5.<\/td>6\u03b2-Naltrexol<\/a><\/td>3.32<\/td>344.3<\/td>326.1<\/td><\/tr>\n
6.<\/td>Tramadol<\/a><\/td>4.42<\/td>264.2<\/td>58.0<\/td><\/tr>\n
7.<\/td>Normeperidine<\/a><\/td>4.82<\/td>234.1<\/td>160.2<\/td><\/tr>\n<\/tbody><\/table>\n\n
<\/th>Peaks<\/th>tR<\/sub> (min)<\/th>Precursor Ion<\/th>Product Ion<\/th><\/tr><\/thead>
8.<\/td>Mirtazapine<\/a><\/td>5.50<\/td>266.1<\/td>195.1<\/td><\/tr>\n
9.<\/td>Clozapine<\/a><\/td>5.87<\/td>328.2<\/td>271.1<\/td><\/tr>\n
10.<\/td>Pentazocine<\/a><\/td>5.95<\/td>286.2<\/td>218.1<\/td><\/tr>\n
11.<\/td>7-Aminoflunitrazepam<\/a><\/td>6.50<\/td>284.1<\/td>135.0<\/td><\/tr>\n
12.<\/td>Fluoxetine<\/a><\/td>7.53<\/td>310.1<\/td>148.0<\/td><\/tr>\n
13.<\/td>Loxapine<\/a><\/td>7.86<\/td>328.1<\/td>271.1<\/td><\/tr>\n
14.<\/td>EMDP<\/a><\/td>8.28<\/td>264.2<\/td>235.2<\/td><\/tr>\n
15.<\/td>Thioridazine<\/a><\/td>8.87<\/td>371.2<\/td>126.1<\/td><\/tr>\n<\/tbody><\/table><\/div>

Conditions<\/h4>
Column<\/th>Raptor Biphenyl (cat.# 9309A1E<\/a>)<\/td><\/tr>
Dimensions:<\/th>100 mm x 3.0 mm ID<\/td><\/tr>
Particle Size:<\/th>2.7 \u00b5m<\/td><\/tr>
Pore Size:<\/th>90 \u00c5<\/td><\/tr>
<\/td>
Temp.:<\/th>40 \u00b0C<\/td><\/tr>
Standard\/Sample<\/th><\/td><\/tr>
Diluent:<\/th>Water<\/td><\/tr>
Conc.:<\/th>0.5-10 \u00b5g\/mL<\/td><\/tr><\/td><\/tr>
Inj. Vol.:<\/th>5 \u00b5L <\/td><\/tr>
Mobile Phase<\/th><\/td><\/tr>
A:<\/th>Water, 0.1% formic acid <\/td><\/tr>
B:<\/th>Methanol, 0.1% formic acid <\/td><\/tr>
<\/td>
Time (min)<\/th>Flow (mL\/min)<\/th>%A<\/th>%B<\/th><\/tr><\/thead>
0.00<\/td>1.0<\/td>85<\/td>15<\/td><\/tr>
6.50<\/td>1.0<\/td>50<\/td>50<\/td><\/tr>
10.00<\/td>1.0<\/td>0<\/td>100<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/td><\/tr><\/table>
Detector<\/th>MS\/MS<\/td><\/tr>
Ion Source:<\/th>Electrospray <\/td><\/tr>
Ion Mode:<\/th>ESI+ <\/td><\/tr>
Mode:<\/th>MRM <\/td><\/tr>
Instrument<\/th>UHPLC<\/td><\/tr>
Sample Preparation<\/th>A standard mix with 15 drugs of abuse was prepared in concentrations ranging from 500-10,000 ng\/mL in water. The solution was vortexed at 3000 rpm for 10 seconds to mix, and the supernatant was injected for LC-MS\/MS analysis.
<\/td><\/tr><\/table><\/div><\/div><\/div>
<\/path><\/g><\/path><\/g><\/svg>Download PDF<\/a><\/div><\/div><\/div>\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n

L\u2019\u00e9tape suivante consiste \u00e0 renseigner les informations sur notre colonne et m\u00e9thode d\u2019origine dans le logiciel de transfert de m\u00e9thodes afin que celui-ci puisse calculer les conditions de m\u00e9thode transf\u00e9r\u00e9es en accord avec les dimensions de la nouvelle colonne. Il est \u00e0 noter que lorsque l\u2019on utilise ce logiciel, vous devez transf\u00e9rer les m\u00e9thodes entre des colonnes ayant le m\u00eame type de particules, par exemple de FPP \u00e0 FPP (\u201cFully Porous Particles\u201d) ou de SPP \u00e0 SPP (\u201cSuperficially Porous Particles\u201d ou particules \u201cCore-shell\u201d). La Figure 2 montre comment saisir les valeurs d\u2019origine : dimensions de la colonne, volume d\u2019injection, \u201cdwell\u201d volume, volume extra-colonne et les conditions de phase mobile \u2013 une analyse en gradient dans ce cas.<\/p>\n\n\n\n

Faites particuli\u00e8rement attention aux valeurs par d\u00e9faut du \u201cdwell\u201d volume et du volume extra-colonne car m\u00eame si ces valeurs ne sont pas forc\u00e9ment celles de votre instrument, elles sont tr\u00e8s importantes puisque le logiciel en tiendra compte lorsqu\u2019il d\u00e9terminera des valeurs comme les r\u00e9solutions de paires critiques ou les temps de r\u00e9tention des compos\u00e9s dans les conditions transf\u00e9r\u00e9es. Si vous ne connaissez pas ces valeurs pour votre instrument, elles peuvent se trouver dans la documentation li\u00e9e \u00e0 l\u2019instrument, mais vous pouvez \u00e9galement les demander \u00e0 votre fabricant d\u2019instrument ou trouver des moyens de les d\u00e9terminer de mani\u00e8re empirique. Vous pouvez avoir plus de d\u00e9tails sur ces valeurs dans le glossaire du logiciel, accessible en cliquant sur le bouton \u201c?\u201d en haut \u00e0 droite.<\/p>\n\n\n

Figure 2 :<\/strong>\u00a0Premi\u00e8re \u00e9tape dans l\u2019utilisation d\u2019un logiciel de transfert de m\u00e9thodes LC : entrer les d\u00e9tails sur la colonne, l\u2019instrument et la m\u00e9thode actuels.<\/div>
\n
\n
\"\"<\/figure>\n<\/div>\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n

L\u2019\u00e9tape suivante consiste \u00e0 entrer les dimensions de la nouvelle colonne, puis c\u2019est au logiciel de transfert de faire son travail ! La Figure 3 montre la nouvelle colonne que nous souhaitons utiliser dans cet exemple. Une fois que les d\u00e9tails de la nouvelle colonne ont \u00e9t\u00e9 saisis, un message d\u2019avertissement peut s\u2019afficher, comme c\u2019est le cas dans notre exemple. L\u2019avertissement sert \u00e0 vous alerter de possibles changements de s\u00e9lectivit\u00e9 avec les nouvelles conditions de la m\u00e9thode (nous d\u00e9terminerons plus loin dans notre exemple si cet avertissement \u00e9tait valable ou non). Pour obtenir une s\u00e9lectivit\u00e9 similaire, il est important que la m\u00e9thode transf\u00e9r\u00e9e corresponde aux conditions de phase mobile avec lesquelles les compos\u00e9s sont \u00e9lu\u00e9s dans la m\u00e9thode d\u2019origine. Le logiciel de transfert va tenter de d\u00e9terminer de nouvelles conditions de phase mobile qui permettent aux compos\u00e9s d\u2019\u00e9luer avec la m\u00eame composition de phase mobile que la m\u00e9thode d\u2019origine, mais parfois les dimensions de la nouvelle colonne ne le permettent malheureusement pas. Si le volume de la nouvelle colonne est significativement diff\u00e9rent de celui de la colonne d\u2019origine, certains compos\u00e9s pourront \u00eatre \u00e9lu\u00e9s avant ou apr\u00e8s que la composition d\u2019origine de la phase mobile ne soit atteinte sur la nouvelle colonne. Dans ce cas, les compos\u00e9s \u00e0 \u00e9lution pr\u00e9coce peuvent \u00e9luer dans des conditions diff\u00e9rentes de %B, et cela peut impacter votre s\u00e9lectivit\u00e9. Si vous souhaitez plus d\u2019informations sur ce point, explorez le glossaire du logiciel. Il existe \u00e9galement une version t\u00e9l\u00e9chargeable du logiciel Pro\u00a0EZ<\/em>LC, comprenant un tableau sp\u00e9cial permettant de visualiser cet effet.<\/p>\n\n\n

Figure 3 :<\/strong>\u00a0Renseigner manuellement les dimensions de la nouvelle colonne.<\/div>
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\n
\"\"<\/figure>\n<\/div>\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n

Utiliser la partie sur les effets des volumes<\/h3>\n\n\n\n

La Figure 4 montre le nouveau volume d\u2019injection et les nouvelles conditions de la m\u00e9thode calcul\u00e9s par le logiciel Pro EZ<\/em>LC. Utiliser les m\u00eames \u201cdwell\u201d volume et volume extra-colonne si vous transf\u00e9rer la m\u00e9thode sur le m\u00eame instrument sans autres modifications. Mais si vous transf\u00e9rez la m\u00e9thode sur un autre instrument (m\u00eame du m\u00eame mod\u00e8le), ou faites certaines modifications \u00e0 votre instrument, vous devrez alors prendre en compte les nouvelles valeurs pour ces deux volumes.<\/p>\n\n\n

Figure 4 :<\/strong>\u00a0Nouveau volume d\u2019injection correspondant aux nouvelles dimensions de colonne et nouvelles conditions de la m\u00e9thode pour tenter de faire correspondre le profil d\u2019\u00e9lution \u00e0 celui de la m\u00e9thode d\u2019origine.<\/div>
\n\n
\"\"<\/figure>\n\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n

Notez qu\u2019il est possible de transf\u00e9rer des m\u00e9thodes isocratiques ainsi que des m\u00e9thodes en gradient, et que le d\u00e9bit transf\u00e9r\u00e9 et calcul\u00e9 est un champ modifiable. Vous pouvez modifier ce d\u00e9bit calcul\u00e9 et ainsi voir comment il peut modifier les temps de r\u00e9tention de vos analytes et leur r\u00e9solution, comme il est montr\u00e9 dans la section R\u00e9sultats ci-dessous.<\/p>\n\n\n\n

Le logiciel de transfert de m\u00e9thodes Pro EZ<\/em>LC tente de calculer des valeurs de d\u00e9bit se trouvant dans la plage id\u00e9ale correspondante aux dimensions donn\u00e9es des colonnes, donc si le d\u00e9bit transf\u00e9r\u00e9 et calcul\u00e9 sort de cette plage de valeurs, le logiciel Pro EZ<\/em>LC l\u2019ajustera dans une plage correspondante \u00e0 la nouvelle colonne. Pour plus d\u2019information sur cette fonctionnalit\u00e9, veuillez consulter le glossaire.<\/p>\n\n\n\n

Interpr\u00e9tation des r\u00e9sultats<\/h3>\n\n\n\n

Cette partie du logiciel de transfert de m\u00e9thodes LC montrera les gains en vitesse d\u2019analyse et les modifications attendues de contre-pression avec la m\u00e9thode transf\u00e9r\u00e9e sur la nouvelle colonne. Il vous permet \u00e9galement de calculer les \u00e9conomies de temps et de solvants sur un nombre donn\u00e9 d\u2019analyses. Dans cet exemple, on remarque que la nouvelle m\u00e9thode produit des r\u00e9sultats en deux fois moins de temps, avec deux fois moins de pression, et en utilisant seulement le quart de la quantit\u00e9 de solvant requise par la m\u00e9thode de d\u00e9part. Mais aurons-nous toujours une r\u00e9solution ad\u00e9quate pour nos paires critiques ? Les champs \u201cR\u00e9solution de paire critique\u201d et \u201cTemps de r\u00e9tention du compos\u00e9\u201d nous permettront de d\u00e9terminer si la nouvelle colonne et la nouvelle m\u00e9thode fourniront toujours des r\u00e9sultats acceptables.<\/p>\n\n\n\n

Si nous nous attardons \u00e0 nouveau sur les r\u00e9sultats de la m\u00e9thode d\u2019origine, nous pouvons voir que la paire critique avec la plus petite valeur de r\u00e9solution est la paire morphine (pic 1) \/ hydromorphone (pic 2), avec une r\u00e9solution de 4.88. Ces deux sont assez bien s\u00e9par\u00e9s et r\u00e9solus et nous pouvons donc penser que la perte d\u2019efficacit\u00e9 entre la colonne d\u2019origine et la nouvelle colonne ne sacrifiera pas la r\u00e9solution, mais nous pouvons v\u00e9rifier cela tout simplement en renseignant la r\u00e9solution d\u2019origine de 4.88 dans le champ appropri\u00e9 et regardant la r\u00e9solution attendue avec la nouvelle m\u00e9thode (Figure 5). Nous renseignons \u00e9galement le temps de r\u00e9tention de la morphine pour avoir une id\u00e9e de sa modification avec les nouvelles conditions.<\/p>\n\n\n

Figure 5 :<\/strong>\u00a0Utilisation de la partie R\u00e9sultats pour v\u00e9rifier les r\u00e9solutions et temps de r\u00e9tention avec la nouvelle colonne et les nouvelles conditions de m\u00e9thode.<\/div>
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\"\"<\/figure>\n\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n

Comme nous pouvions nous y attendre de par la perte en nombre de plateau, nous remarquons une diminution de la r\u00e9solution entre ces deux paires critiques, mais nous remarquons \u00e9galement que la nouvelle r\u00e9solution calcul\u00e9e est encore bien au-dessus de ce qui est requis pour avoir une s\u00e9paration avec retour \u00e0 la ligne de base (R = 1.5). En voyant ceci, nous pourrions conclure que si notre paire de compos\u00e9s la plus critique (\u00e9luant le plus t\u00f4t et ayant la r\u00e9solution la plus faible) est toujours s\u00e9par\u00e9e et r\u00e9solue avec la nouvelle colonne et les conditions transf\u00e9r\u00e9es, alors tout devrait bien se passer pour le reste de notre s\u00e9paration chromatographique, mais v\u00e9rifions cela de fa\u00e7on pratique.<\/p>\n\n\n\n

La Figure 6 montre les r\u00e9sultats empiriques d\u2019un m\u00eame m\u00e9lange de compos\u00e9s analys\u00e9s en utilisant les nouvelles dimensions de colonne et les conditions de m\u00e9thode transf\u00e9r\u00e9es.<\/p>\n\n\n

Figure 6 :<\/strong>\u00a0R\u00e9sultats empiriques en utilisant la nouvelle colonne et les conditions de m\u00e9thode transf\u00e9r\u00e9es.<\/div>
\n
\"Translation<\/div>

LC_CF0757<\/p>

Peaks<\/h4>\n
<\/th>Peaks<\/th>tR<\/sub> (min)<\/th>Precursor Ion<\/th>Product Ion<\/th><\/tr><\/thead>\n
1.<\/td>Morphine<\/a><\/td>0.66<\/td>286.2<\/td>152.1<\/td><\/tr>\n
2.<\/td>Hydromorphone<\/a><\/td>0.88<\/td>286.2<\/td>184.9<\/td><\/tr>\n
3.<\/td>Norcodeine<\/a><\/td>1.15<\/td>286.1<\/td>151.9<\/td><\/tr>\n
4.<\/td>Norhydrocodone<\/a><\/td>1.51<\/td>286.1<\/td>199.0<\/td><\/tr>\n
5.<\/td>6\u03b2-Naltrexol<\/a><\/td>2.0<\/td>344.3<\/td>326.1<\/td><\/tr>\n
6.<\/td>Tramadol<\/a><\/td>2.55<\/td>264.2<\/td>58.0<\/td><\/tr>\n
7.<\/td>Normeperidine<\/a><\/td>2.74<\/td>234.1<\/td>160.2<\/td><\/tr>\n<\/tbody><\/table>\n\n
<\/th>Peaks<\/th>tR<\/sub> (min)<\/th>Precursor Ion<\/th>Product Ion<\/th><\/tr><\/thead>
8.<\/td>Mirtazapine<\/a><\/td>3.1<\/td>266.1<\/td>195.1<\/td><\/tr>\n
9.<\/td>Clozapine<\/a><\/td>3.26<\/td>328.2<\/td>271.1<\/td><\/tr>\n
10.<\/td>Pentazocine<\/a><\/td>3.3<\/td>286.2<\/td>218.1<\/td><\/tr>\n
11.<\/td>7-Aminoflunitrazepam<\/a><\/td>3.54<\/td>284.1<\/td>135.0<\/td><\/tr>\n
12.<\/td>Fluoxetine<\/a><\/td>4.02<\/td>310.1<\/td>148.0<\/td><\/tr>\n
13.<\/td>Loxapine<\/a><\/td>4.18<\/td>328.1<\/td>271.1<\/td><\/tr>\n
14.<\/td>EMDP<\/a><\/td>4.38<\/td>264.2<\/td>235.2<\/td><\/tr>\n
15.<\/td>Thioridazine<\/a><\/td>4.66<\/td>371.2<\/td>126.1<\/td><\/tr>\n<\/tbody><\/table><\/div>

Conditions<\/h4>
Column<\/th>Raptor Biphenyl (cat.# 9309A52<\/a>)<\/td><\/tr>
Dimensions:<\/th>50 mm x 2.1 mm ID<\/td><\/tr>
Particle Size:<\/th>2.7 \u00b5m<\/td><\/tr>
Pore Size:<\/th>90 \u00c5<\/td><\/tr>
<\/td>
Temp.:<\/th>40 \u00b0C<\/td><\/tr>
Standard\/Sample<\/th><\/td><\/tr>
Diluent:<\/th>Water<\/td><\/tr>
Conc.:<\/th>0.5-10 \u00b5g\/mL<\/td><\/tr><\/td><\/tr>
Inj. Vol.:<\/th>1 \u00b5L <\/td><\/tr>
Mobile Phase<\/th><\/td><\/tr>
A:<\/th>Water, 0.1% formic acid <\/td><\/tr>
B:<\/th>Methanol, 0.1% formic acid <\/td><\/tr>
<\/td>
Time (min)<\/th>Flow (mL\/min)<\/th>%A<\/th>%B<\/th><\/tr><\/thead>
0.00<\/td>0.5<\/td>85<\/td>15<\/td><\/tr>
3.20<\/td>0.5<\/td>50<\/td>50<\/td><\/tr>
4.90<\/td>0.5<\/td>0<\/td>100<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/td><\/tr><\/table>
Detector<\/th>MS\/MS<\/td><\/tr>
Ion Source:<\/th>Electrospray <\/td><\/tr>
Ion Mode:<\/th>ESI+ <\/td><\/tr>
Mode:<\/th>MRM <\/td><\/tr>
Instrument<\/th>UHPLC<\/td><\/tr>
Sample Preparation<\/th>A standard mix with 15 drugs of abuse was prepared in the concentrations ranging from 500-10,000 ng\/mL in water. The solution was vortexed at 3000 rpm for 10 seconds to mix, and the supernatant was injected for LC-MS\/MS analysis.<\/td><\/tr><\/table><\/div><\/div><\/div>
<\/path><\/g><\/path><\/g><\/svg>Download PDF<\/a><\/div><\/div><\/div>\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n

En analyse r\u00e9elle, en utilisant la nouvelle colonne et la nouvelle m\u00e9thode, le temps de r\u00e9tention de la morphine \u00e9tait de 0.66 minute, soit seulement 0.01 minute de plus que le temps de r\u00e9tention pr\u00e9dit par le logiciel de transfert de m\u00e9thodes LC. La r\u00e9solution entre la morphine et l\u2019hydromorphone \u00e9tait de R = 3.07 lorsque la r\u00e9solution pr\u00e9dite \u00e9tait de R = 2.80, soit une diff\u00e9rence d\u2019environ 10%, mais le logiciel reste toujours du c\u00f4t\u00e9 \u201cconservateur\u201d en ce qui concerne la r\u00e9solution de paires critiques. Donc, avec des r\u00e9sultats d\u2019exp\u00e9rience d\u00e9montrant une r\u00e9solution encore meilleure que celle attendue, nous pouvons adopter la nouvelle colonne et les nouvelles conditions de m\u00e9thode, sans craindre de perdre la r\u00e9solution de nos paires critiques.<\/p>\n\n\n\n

Si en revanche une paire critique avait eu une r\u00e9solution de R = 2 dans les conditions d\u2019origine, il est probable que ce transfert particulier
(d\u2019une colonne 3.0 x 100 mm – 2.7\u00b5m \u00e0 une colonne 2.1 x 50 mm \u2013 2.7\u00b5m) aurait eu un pouvoir de r\u00e9solution insuffisant dans les conditions transf\u00e9r\u00e9es pour \u00e9viter une co\u00e9lution (r\u00e9solution pr\u00e9dite R = 1.15 dans ces conditions).<\/p>\n\n\n\n

Conclusion<\/h2>\n\n\n\n

Il existe de nombreuses raisons pour lesquelles un laboratoire peut \u00eatre int\u00e9ress\u00e9 \u00e0 transf\u00e9rer une m\u00e9thode d\u2019une colonne \u00e0 une autre, et un outil d\u2019aide au transfert, en ligne et gratuit, comme le logiciel de transfert de m\u00e9thodes Restek Pro EZ<\/em>LC, peut aider \u00e0 d\u00e9terminer les meilleures options en quelques minutes sur votre ordinateur plut\u00f4t qu\u2019en quelques heures ou quelques jours au laboratoire. Et m\u00eame si utilise majoritairement les transferts de m\u00e9thodes LC pour gagner du temps, du solvant et\/ou des \u00e9chantillons, cela peut \u00e9galement fonctionner dans l\u2019autre sens, comme dans l\u2019exemple pr\u00e9sent\u00e9 ici. Si, par exemple, vous avez \u00e0 transf\u00e9rer des m\u00e9thodes d\u00e9velopp\u00e9es sur des syst\u00e8mes UHPLC de haute technologie vers des laboratoires \u00e9quip\u00e9s d\u2019instruments HPLC \u201ctraditionnels\u201d, le logiciel de transfert de m\u00e9thodes pourra vous aider \u00e0 obtenir les m\u00eames r\u00e9sultats en utilisant des colonnes de plus grandes dimensions que celles d\u2019origine.<\/p>\n\n\n\n

Donc dans notre exemple, le laboratoire pourrait op\u00e9rer le transfert en toute confiance, r\u00e9duisant de moiti\u00e9 le temps d\u2019analyse et la contre-pression (plus appropri\u00e9 pour les syst\u00e8mes HPLC \u201ctraditionnels\u201d) et en utilisant juste le quart de la quantit\u00e9 de solvant qu\u2019ils auraient autrement consomm\u00e9, et il am\u00e9liorera probablement \u00e9galement la sensibilit\u00e9 de la m\u00e9thode.<\/p>\n\n\n\n

Vous avez des m\u00e9thodes \u00e0 transf\u00e9rer dans votre laboratoire ? Si tel est le cas, n\u2019h\u00e9sitez pas \u00e0 utiliser le logiciel de transfert de m\u00e9thodes Restek Pro EZ<\/em>LC<\/a> et \u00e0 nous contacter si vous avez des questions. Bons transferts !<\/p>\n\n\n\n

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Utiliser une colonne plus courte, avec un diam\u00e8tre interne plus faible et des particules plus petites, peut permettre d’augmenter votre cadence d\u2019analyses tout en maintenant vos performances chromatographiques. Mais vous devez aussi modifier les conditions de la m\u00e9thode afin qu\u2019elles correspondent \u00e0 la nouvelle colonne pour ne pas perdre en r\u00e9solution. Le logiciel de transfert de m\u00e9thodes Restek Pro EZLC peut aider \u00e0 d\u00e9terminer les meilleures options en quelques minutes.<\/p>\n","protected":false},"author":11,"featured_media":89936,"comment_status":"closed","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"_kad_blocks_custom_css":"","_kad_blocks_head_custom_js":"","_kad_blocks_body_custom_js":"","_kad_blocks_footer_custom_js":"","_kadence_starter_templates_imported_post":false,"_kad_post_transparent":"","_kad_post_title":"","_kad_post_layout":"","_kad_post_sidebar_id":"","_kad_post_content_style":"","_kad_post_vertical_padding":"","_kad_post_feature":"","_kad_post_feature_position":"","_kad_post_header":false,"_kad_post_footer":false,"footnotes":""},"categories":[462],"tags":[],"industries-application":[],"post-badge":[],"resource-type":[],"product-library":[2463,2445],"resource-technique":[2318],"ppma_author":[414],"class_list":["post-43692","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-articles-fr","product-library-colonnes-lc","product-library-produits-pour-la-chromatographie-en-phase-liquide","resource-technique-chromatographie-en-phase-liquide"],"acf":[],"taxonomy_info":{"category":[{"value":462,"label":"Articles"}],"product-library":[{"value":2463,"label":"Colonnes LC"},{"value":2445,"label":"Produits pour la chromatographie en phase liquide"}],"resource-technique":[{"value":2318,"label":"Chromatographie en phase liquide"}]},"featured_image_src_large":["https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/feature-GNAR3316-1024x536.jpg",1024,536,true],"author_info":{"display_name":"Restek Corporation","author_link":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/author\/restek-corporation\/"},"comment_info":0,"category_info":[{"term_id":462,"name":"Articles","slug":"articles-fr","term_group":0,"term_taxonomy_id":462,"taxonomy":"category","description":"","parent":0,"count":467,"filter":"raw","cat_ID":462,"category_count":467,"category_description":"","cat_name":"Articles","category_nicename":"articles-fr","category_parent":0}],"tag_info":false,"authors":[{"term_id":414,"user_id":11,"is_guest":0,"slug":"restek-corporation","display_name":"Restek Corporation","avatar_url":{"url":"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/Restek_Favicon_300x300.jpg","url2x":"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/Restek_Favicon_300x300.jpg"},"0":null,"1":"","2":"","3":"","4":"","5":"","6":"","7":"","8":""}],"_links":{"self":[{"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/43692","targetHints":{"allow":["GET"]}}],"collection":[{"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts"}],"about":[{"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/types\/post"}],"author":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/users\/11"}],"replies":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/comments?post=43692"}],"version-history":[{"count":10,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/43692\/revisions"}],"predecessor-version":[{"id":85734,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/posts\/43692\/revisions\/85734"}],"wp:featuredmedia":[{"embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/media\/89936"}],"wp:attachment":[{"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/media?parent=43692"}],"wp:term":[{"taxonomy":"category","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/categories?post=43692"},{"taxonomy":"post_tag","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/tags?post=43692"},{"taxonomy":"industries-application","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/industries-application?post=43692"},{"taxonomy":"post-badge","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/post-badge?post=43692"},{"taxonomy":"resource-type","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/resource-type?post=43692"},{"taxonomy":"product-library","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/product-library?post=43692"},{"taxonomy":"resource-technique","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/resource-technique?post=43692"},{"taxonomy":"author","embeddable":true,"href":"https:\/\/discover.restek.com\/fr\/wp-json\/wp\/v2\/ppma_author?post=43692"}],"curies":[{"name":"wp","href":"https:\/\/api.w.org\/{rel}","templated":true}]}}