{"id":43350,"date":"2020-10-15T14:30:00","date_gmt":"2020-10-15T14:30:00","guid":{"rendered":"https:\/\/discover.restek.com\/uncategorized\/analisi-lc-msms-di-fentanyl-e-analoghi-nellurina-umana\/"},"modified":"2026-01-28T21:58:32","modified_gmt":"2026-01-28T21:58:32","slug":"analisi-lc-msms-di-fentanyl-e-analoghi-nellurina-umana","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/discover.restek.com\/it\/application-notes-it\/cfan2820-it\/analisi-lc-msms-di-fentanyl-e-analoghi-nellurina-umana","title":{"rendered":"Analisi LC-MS\/MS di fentanyl e analoghi nell\u2019urina umana"},"content":{"rendered":"\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Abstract<\/h2>\n\n\n\n<p>Gli oppioidi sintetici, tra cui fentanyl e sufentanil, presentano un elevato potere analgesico. L\u2019abuso di questi antidolorifici da prescrizione, insieme a una variet\u00e0 di analoghi illegali in rapido aumento, rappresenta un problema significativo per la salute pubblica. Nell\u2019ambito del presente studio abbiamo sviluppato un semplice metodo dilute-and-shoot che garantisce un\u2019analisi rapida, della durata di 3,5 minuti, di fentanyl e dei suoi analoghi (norfentanyl, acetylfentanyl, alfentanil, butyrylfentanyl, carfentanil, remifentanil e sufentanil) nell\u2019urina umana con una colonna Raptor bifenilica in LC-MS\/MS.<\/p>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Introduzione<\/h2>\n\n\n\n<p>Negli ultimi anni il consumo illecito degli oppioidi sintetici \u00e8 aumentato esponenzialmente, e oggi ci troviamo ad affrontare una vera e propria epidemia a livello mondiale. Le migliaia di decessi annuali dovuti a overdose di oppioidi sintetici sono dovute per la maggior parte al fentanyl e ai suoi analoghi. L\u2019elevato potere analgesico rende le sostanze come fentanyl, alfentanil, remifentanil e sufentanil dei potenti antidolorifici dalle valide applicazioni mediche, che inducono tuttavia una grave dipendenza e sono oggetto di abuso. Per esempio, il carfentanil \u00e8 un anestetico estremamente potente che viene usato come tranquillante negli animali di grandi dimensioni, soprattutto elefanti. Con una potenza 10.000 volte superiore rispetto alla morfina, \u00e8 uno degli oppioidi sintetici pi\u00f9 potenti sul mercato. All\u2019aumento del consumo illegale di questa sostanza, nella maggior parte dei casi miscelata all\u2019eroina, sono da attribuire numerosi decessi per overdose avvenuti a partire dal 2016. Oltre all\u2019abuso di tali farmaci da prescrizione, l\u2019attuale crisi degli oppioidi \u00e8 alimentata da un numero crescente di analoghi illegali, tra cui l\u2019acetylfentanyl e il butyrylfentanyl, studiati ad hoc per evadere i controlli antidroga delle forze dell\u2019ordine.<\/p>\n\n\n\n<p>Parallelamente all\u2019aumento degli oppioidi in circolazione e dei decessi, si assiste alla necessit\u00e0 sempre pi\u00f9 pressante di poter contare su un metodo rapido e preciso per l\u2019analisi simultanea di fentanyl e dei suoi analoghi. Per questa ragione abbiamo sviluppato un metodo LC-MS\/MS per la misurazione del fentanyl insieme a sei analoghi e un metabolita (norfentanyl) nell\u2019urina umana (Figura 1). Una semplice preparazione dilute-and-shoot del campione \u00e8 stata combinata con un\u2019analisi cromatografica rapida (della durata di 3,5 minuti) mediante l\u2019impiego di una colonna Raptor bifenilica. Questo metodo garantisce precisione e accuratezza nell\u2019identificazione e quantificazione del fentanyl e dei suoi analoghi, prestandosi cos\u00ec a diverse applicazioni analitiche, tra cui tossicologia clinica, analisi forensi, test antidroga sul lavoro e ricerca farmaceutica.<\/p>\n\n\n<div class=\"wp-block-custom-chromatogram-article-top\"><div class=\"chromatogram-article-placeholder\"><div class=\"figure-heading\"><strong>Figura 1 :<\/strong>\u00a0Strutture chimiche<\/div><div class='chromatogram-article-inner-full'><div class=\"chromatogram-article-inner\">\n<style>.kb-image43350_4a9fe5-90 .kb-image-has-overlay:after{opacity:0.3;}<\/style>\n<div class=\"wp-block-kadence-image kb-image43350_4a9fe5-90\"><figure class=\"aligncenter size-large\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"1024\" height=\"788\" src=\"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/\/figure-article-CFAN2820-01-1024x788.jpg\" alt=\"\" class=\"kb-img wp-image-18932\" title=\"-\" srcset=\"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-01-1024x788.jpg 1024w, https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-01-300x231.jpg 300w, https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-01-768x591.jpg 768w, https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-01-1536x1182.jpg 1536w, https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-01.jpg 1800w\" sizes=\"auto, (max-width: 1024px) 100vw, 1024px\" \/><\/figure><\/div>\n\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n<div style=\"height:20px\" aria-hidden=\"true\" class=\"wp-block-spacer\"><\/div>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Studio sperimentale<\/h2>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Preparazione del campione<\/h3>\n\n\n\n<p>Una miscela di urina umana \u00e8 stata fortificata con gli analiti. Un&#8217;aliquota di 80 \u00b5L di urina \u00e8 stata miscelata in un vial filtrante Thomson SINGLE StEP a 320 \u00b5L di soluzione acqua:metanolo 70:30 (diluita 5 volte) e 10 \u00b5L di standard interno (40 ng\/mL in metanolo) (Restek&nbsp;cat.# 25895). Dopo la filtrazione con membrana PVDF da 0,2 \u00b5m, \u00e8 stata eseguita l&#8217;iniezione di 5 \u00b5L in LC-MS\/MS.<\/p>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Standard di calibrazione e campioni di controllo qualit\u00e0<\/h3>\n\n\n\n<p>Gli standard di calibrazione sono stati preparati in mix di urina umana a una concentrazione di 0,05 &#8211; 0,10 &#8211; 0,25 &#8211; 0,50 &#8211; 1,00 &#8211; 2,50 &#8211; 5,00 &#8211; 10,0 &#8211; 25,0 e 50,0 ng\/mL. Sono stati preparati tre livelli di campioni QC (0,75 &#8211; 4,0 e 20 ng\/ml) nella matrice per testare l&#8217;accuratezza e la precisione rispetto alle curve di calibrazione precedentemente definite. Le analisi di recupero sono state svolte in tre diversi giorni. Tutti gli standard e i campioni QC sono stati sottoposti al metodo di preparazione del campione descritto in precedenza.<\/p>\n\n\n\n<p>L&#8217;analisi LC-MS\/MS di fentanyl e dei suoi analoghi \u00e8 stata realizzata con lo strumento ACQUITY UPLC abbinato a uno spettrometro di massa Waters Xevo TQ-S. Di seguito si riportano i parametri dello strumento, mentre le transizioni ioniche degli analiti sono raccolte nella Tabella I.<\/p>\n\n\n<figure class=\"wp-block-table\">\n<table class=\"has-fixed-layout\" style=\"border-style: none;\">\n<tbody>\n<tr>\n<td>Colonna analitica:<\/td>\n<td colspan=\"2\">Raptor Biphenyl (5 \u00b5m, 50 mm x 2.1 mm;\u00a0cat.#\u00a09309552)<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Colonna di guardia:<\/td>\n<td colspan=\"2\">Cartuccia per colonne di guardia Raptor bifeliniche EXP, (5 \u00b5m, 5 mm x 2.1 mm;\u00a0cat.#\u00a0930950252)<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Fase mobile A:<\/td>\n<td colspan=\"2\">0.1% acido formico in acqua<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Fase mobile B:<\/td>\n<td colspan=\"2\">0.1% acido formico in acqua<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Gradiente<\/td>\n<td>Tempo (min)<\/td>\n<td>%B<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>\u00a0<\/td>\n<td>0.00<\/td>\n<td>30<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>\u00a0<\/td>\n<td>2.50<\/td>\n<td>70<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>\u00a0<\/td>\n<td>2.51<\/td>\n<td>30<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>\u00a0<\/td>\n<td>3.50<\/td>\n<td>30<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Velocit\u00e0 flusso:<\/td>\n<td colspan=\"2\">0.4 mL\/min<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Volume iniezione:<\/td>\n<td colspan=\"2\">5 \u00b5L<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Temperatura colonna:<\/td>\n<td colspan=\"2\">40 \u00b0C<\/td>\n<\/tr>\n<tr>\n<td>Modalit\u00e0 ioni:<\/td>\n<td colspan=\"2\">ESI positivo<\/td>\n<\/tr>\n<\/tbody>\n<\/table>\n<\/figure>\n\n\n<div style=\"height:20px\" aria-hidden=\"true\" class=\"wp-block-spacer\"><\/div>\n\n\n\n<p><strong>Tabella I:<\/strong>&nbsp;Transizioni ioniche<\/p>\n\n\n\n<figure class=\"wp-block-table\"><table class=\"has-fixed-layout\"><thead><tr><th><strong>Analita<\/strong><\/th><th><strong>Ione precursore<\/strong><\/th><th><strong>Ione prodotto quantificatore<\/strong><\/th><th><strong>Ione prodotto qualificatore<\/strong><\/th><th><strong>Standard interno<\/strong><\/th><\/tr><\/thead><tbody><tr><td>Norfentanyl<\/td><td>233.27<\/td><td>84.15<\/td><td>56.06<\/td><td>Norfentanyl-D<sub>5<\/sub><\/td><\/tr><tr><td>Acetyl fentanyl<\/td><td>323.37<\/td><td>188.25<\/td><td>105.15<\/td><td>Acetyl fentanyl-<sup>13<\/sup>C<sub>6<\/sub><\/td><\/tr><tr><td>Fentanyl<\/td><td>337.37<\/td><td>188.26<\/td><td>105.08<\/td><td>Fentanyl-D<sub>5<\/sub><\/td><\/tr><tr><td>Butyryl fentanyl<\/td><td>351.43<\/td><td>188.20<\/td><td>105.15<\/td><td>Carfentanil-D<sub>5<\/sub><\/td><\/tr><tr><td>Remifentanil<\/td><td>377.37<\/td><td>113.15<\/td><td>317.30<\/td><td>Norfentanyl-D<sub>5<\/sub><\/td><\/tr><tr><td>Sufentanil<\/td><td>387.40<\/td><td>238.19<\/td><td>111.06<\/td><td>Sufentanil-D<sub>5<\/sub><\/td><\/tr><tr><td>Carfentanil<\/td><td>395.40<\/td><td>113.14<\/td><td>335.35<\/td><td>Carfentanil-D<sub>5<\/sub><\/td><\/tr><tr><td>Alfentanil<\/td><td>417.47<\/td><td>268.31<\/td><td>197.23<\/td><td>Acetyl fentanyl-<sup>13<\/sup>C<sub>6<\/sub><\/td><\/tr><tr><td>Norfentanyl-D<sub>5<\/sub><\/td><td>238.30<\/td><td>84.15<\/td><td>\u2014<\/td><td>\u2014<\/td><\/tr><tr><td>Acetyl fentanyl-<sup>13<\/sup>C<sub>6<\/sub><\/td><td>329.37<\/td><td>188.25<\/td><td>\u2014<\/td><td>\u2014<\/td><\/tr><tr><td>Fentanyl-D<sub>5<\/sub><\/td><td>342.47<\/td><td>188.27<\/td><td>\u2014<\/td><td>\u2014<\/td><\/tr><tr><td>Sufentanil-D<sub>5<\/sub><\/td><td>392.40<\/td><td>238.25<\/td><td>\u2014<\/td><td>\u2014<\/td><\/tr><tr><td>Carfentanil-D<sub>5<\/sub><\/td><td>400.40<\/td><td>340.41<\/td><td>\u2014<\/td><td>\u2014<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Risultati e discussione<\/h2>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Prestazione cromatografica<\/h3>\n\n\n\n<p>Tutti gli otto analiti sono stati ben separati all&#8217;interno di un gradiente di eluizione di 2,5 min (tempo di analisi totale 3,5 min) su una colonna Raptor bifenilica (Figura 2). Non \u00e8 stata rilevata una significativa interferenza della matrice che potesse ripercuotersi negativamente sulla quantificazione dei campioni di urina diluiti cinque volte. La colonna Raptor bifenilica con particelle da 5 \u00b5m impiegata nell\u2019ambito dell\u2019esperimento \u00e8 una colonna con particelle a superficie porosa (SPP), selezionata per il metodo illustrato perch\u00e9 garantisce prestazioni simili alle colonne con particelle totalmente porose (FPP) dalla dimensione minore pur generando una minore contropressione di sistema.<\/p>\n\n\n<div class=\"wp-block-custom-chromatogram-article-top\"><div class=\"chromatogram-article-placeholder\"><div class=\"figure-heading\"><strong>Figura 2 :<\/strong>\u00a0Grazie alla colonna Raptor bifenilica abbiamo ottenuto una separazione efficace di tutti i composti target presenti nell\u2019urina, senza rilevare interferenze della matrice.<\/div><div class='chromatogram-article-inner-full'><div class=\"chromatogram-article-inner\">\n\n<p class=\"has-medium-font-size\"><strong>Bianco urina<\/strong><\/p>\n\n\n<div class=\"wp-block-custom-chromatogram-article\"><div class=\"wp-block-custom-chromatogram-article\"><div class=\"chromatogram-image wide-image\"><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/ez.restek.com\/images\/cgram\/lc_cf0716.png\" alt=\"Blank Urine for Comparison to Fentanyl and Analogues on Raptor Biphenyl by LC-MS\/MS\" title=\"-\"><\/div><p class=\"article-id\" style=\"text-align:center\"> LC_CF0716<\/p><div class=\"chromatogram-related-skus\"><h4>Related SKUs<\/h4><ul><li>930950252<\/li><li>9309552<\/li><\/ul><\/div><div class=\"chromatogram-related-searches\"><h4>Related Searches<\/h4><ul><li>LC-MS\/MS<\/li><li>Raptor<\/li><li>acetyl fentanyl<\/li><li>alfentanil<\/li><li>biphenyl<\/li><li>butyryl fentanyl<\/li><li>carfentanil<\/li><li>fentanyl<\/li><li>norfentanyl<\/li><li>remifentanil<\/li><li>sufentani<\/li><\/ul><\/div><div class=\"chromatogram-pdf-link\"><a href=\"https:\/\/ez.restek.com\/images\/cgram\/lc_cf0716.pdf\" target=\"_blank\" rel=\"noopener noreferrer\"><svg xmlns=\"http:\/\/www.w3.org\/2000\/svg\" width=\"18\" height=\"18\" viewBox=\"0 0 18 18\"><g data-name=\"Group 2996\"><path data-name=\"Rectangle 1246\" d=\"M0 0h18v18H0z\" style=\"fill: none;\"><\/path><\/g><g data-name=\"Group 2997\"><path data-name=\"Path 729\" d=\"M13.412 11.4v2.017H5.345V11.4H4v2.017a1.349 1.349 0 0 0 1.345 1.345h8.068a1.349 1.349 0 0 0 1.345-1.345V11.4zm-.672-2.694-.948-.948-1.741 1.735V4H8.706v5.493L6.965 7.758l-.948.948 3.361 3.361z\" transform=\"translate(-.437 -.414)\" style=\"fill: rgb(13, 123, 196);\"><\/path><\/g><\/svg>Download PDF<\/a><\/div><\/div><\/div>\n\n\n<p class=\"has-medium-font-size\"><strong>Standard urina 10 ng\/mL<\/strong><\/p>\n\n\n<div class=\"wp-block-custom-chromatogram-article\"><div class=\"wp-block-custom-chromatogram-article\"><div class=\"chromatogram-image regular-image\"><img decoding=\"async\" src=\"https:\/\/ez.restek.com\/images\/cgram\/lc_cf0715.png\" alt=\"Fentanyl and Analogues in Urine on Raptor Biphenyl by LC-MS\/MS\" title=\"-\"><\/div><p class=\"article-id\" style=\"text-align:center\"> LC_CF0715<\/p><div class=\"chromatogram-peaks\"><h4>Peaks<\/h4><table class=\"peaks col-12\">\n<thead><tr><th><\/th><th style=\"text-align: left;width: 75px\">Peaks<\/th><th style=\"text-align: center;width: 75px\">t<sub>R<\/sub> (min)<\/th><th style=\"text-align: center;width: 75px\">Conc.<br \/>(ng\/mL)<\/th><th style=\"text-align: center;width: 75px\">Precursor Ion<\/th><th style=\"text-align: center;width: 75px\">Product Ion<\/th><th style=\"text-align: center;width: 75px\">Product Ion<\/th><\/tr><\/thead>\n<tbody><tr><td class=\"num\">1.<\/td><td class=\"cmpd\">Norfentanyl-d5 <\/td><td class=\"oth\">1.03<\/td><td class=\"oth\">1<\/td><td class=\"oth\">238.30<\/td><td class=\"oth\">84.15<\/td><td class=\"oth\">&#8211;<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">2.<\/td><td class=\"cmpd\"><a class=\"cmpd_link\" title=\"View compound information for Norfentanyl\" href=\"https:\/\/ez.restek.com\/compound\/view\/en\/1609-66-1\/Norfentanyl\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Norfentanyl<\/a><\/td><td class=\"oth\">1.04<\/td><td class=\"oth\">10<\/td><td class=\"oth\">233.27<\/td><td class=\"oth\">84.15<\/td><td class=\"oth\">56.06<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">3.<\/td><td class=\"cmpd\"><a class=\"cmpd_link\" title=\"View compound information for Remifentanil\" href=\"https:\/\/ez.restek.com\/compound\/view\/en\/132875-61-7\/Remifentanil\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Remifentanil<\/a><\/td><td class=\"oth\">1.34<\/td><td class=\"oth\">10<\/td><td class=\"oth\">377.37<\/td><td class=\"oth\">113.15<\/td><td class=\"oth\">317.30<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">4.<\/td><td class=\"cmpd\">Acetyl fentanyl-13C6<\/td><td class=\"oth\">1.69<\/td><td class=\"oth\">1<\/td><td class=\"oth\">329.37<\/td><td class=\"oth\">188.25<\/td><td class=\"oth\">&#8211;<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">5.<\/td><td class=\"cmpd\"><a class=\"cmpd_link\" title=\"View compound information for Acetyl fentanyl\" href=\"https:\/\/ez.restek.com\/compound\/view\/en\/3258-84-2\/Acetyl fentanyl\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Acetyl fentanyl<\/a><\/td><td class=\"oth\">1.69<\/td><td class=\"oth\">10<\/td><td class=\"oth\">323.37<\/td><td class=\"oth\">188.25<\/td><td class=\"oth\">105.15<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">6.<\/td><td class=\"cmpd\"><a class=\"cmpd_link\" title=\"View compound information for Alfentanil\" href=\"https:\/\/ez.restek.com\/compound\/view\/en\/71195-58-9\/Alfentanil\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Alfentanil<\/a><\/td><td class=\"oth\">1.88<\/td><td class=\"oth\">10<\/td><td class=\"oth\">417.47<\/td><td class=\"oth\">268.31<\/td><td class=\"oth\">197.23<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">7.<\/td><td class=\"cmpd\">Fentanyl-d5<\/td><td class=\"oth\">1.95<\/td><td class=\"oth\">1<\/td><td class=\"oth\">342.47<\/td><td class=\"oth\">188.27<\/td><td class=\"oth\">&#8211;<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">8.<\/td><td class=\"cmpd\"><a class=\"cmpd_link\" title=\"View compound information for Fentanyl\" href=\"https:\/\/ez.restek.com\/compound\/view\/en\/437-38-7\/Fentanyl\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Fentanyl<\/a><\/td><td class=\"oth\">1.96<\/td><td class=\"oth\">10<\/td><td class=\"oth\">337.37<\/td><td class=\"oth\">188.26<\/td><td class=\"oth\">105.08<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">9.<\/td><td class=\"cmpd\">Carfentanil-d5<\/td><td class=\"oth\">2.04<\/td><td class=\"oth\">1<\/td><td class=\"oth\">400.40<\/td><td class=\"oth\">340.41<\/td><td class=\"oth\">&#8211;<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">10.<\/td><td class=\"cmpd\"><a class=\"cmpd_link\" title=\"View compound information for Carfentanil\" href=\"https:\/\/ez.restek.com\/compound\/view\/en\/59708-52-0\/Carfentanil\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Carfentanil<\/a><\/td><td class=\"oth\">2.05<\/td><td class=\"oth\">10<\/td><td class=\"oth\">395.40<\/td><td class=\"oth\">113.14<\/td><td class=\"oth\">335.35<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">11.<\/td><td class=\"cmpd\"><a class=\"cmpd_link\" title=\"View compound information for Butyryl fentanyl\" href=\"https:\/\/ez.restek.com\/compound\/view\/en\/1443-52-3\/Butyryl fentanyl\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Butyryl fentanyl<\/a><\/td><td class=\"oth\">2.15<\/td><td class=\"oth\">10<\/td><td class=\"oth\">351.43<\/td><td class=\"oth\">188.20<\/td><td class=\"oth\">105.15<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">12.<\/td><td class=\"cmpd\">Sufentanil-d5<\/td><td class=\"oth\">2.25<\/td><td class=\"oth\">1<\/td><td class=\"oth\">392.40<\/td><td class=\"oth\">238.25<\/td><td class=\"oth\">&#8211;<\/td><\/tr>\n<tr><td class=\"num\">13.<\/td><td class=\"cmpd\"><a class=\"cmpd_link\" title=\"View compound information for Sufentanil\" href=\"https:\/\/ez.restek.com\/compound\/view\/en\/56030-54-7\/Sufentanil\" target=\"_blank\" rel=\"noopener\">Sufentanil<\/a><\/td><td class=\"oth\">2.26<\/td><td class=\"oth\">10<\/td><td class=\"oth\">387.40<\/td><td class=\"oth\">238.19<\/td><td class=\"oth\">111.06<\/td><\/tr>\n<\/tbody><\/table><\/div><div class=\"chromatogram-conditions\"><h4>Conditions<\/h4><div class=\"conditions-container container-fluid\"><div class=\"row\"><table class=\"conditions col-lg-6 col-12\"><tr><th class=\"conditions_header\" scope=\"row\">Column<\/th><td>Raptor Biphenyl  (<a target=\"_blank\" href=\"https:\/\/www.restek.com\/p\/9309552?utm_source=chromatograms&amp;utm_medium=link&amp;utm_campaign=LC_CF0715\" rel=\"noopener\">cat.# 9309552<\/a>)<\/td><\/tr><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">Dimensions:<\/th><td>50 mm x 2.1 mm ID<\/td><\/tr><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">Particle Size:<\/th><td>5 \u00b5m<\/td><\/tr><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">Pore Size:<\/th><td>90 \u00c5<\/td><\/tr><tr><td><\/td><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">Guard Column:<\/th><td>Raptor Biphenyl EXP guard cartridge 5 mm, 2.1 mm ID, 5 \u00b5m (<a target=\"_blank\" href=\"https:\/\/www.restek.com\/p\/930950252?utm_source=chromatograms&amp;utm_medium=link&amp;utm_campaign=LC_CF0715\" rel=\"noopener\">cat.# 930950252<\/a>)<\/td><\/tr><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">Temp.:<\/th><td>40 \u00b0C<\/td><\/tr><tr class=\"cgram_header_row\"><th class=\"conditions_header\" scope=\"row\">Standard\/Sample<\/th><td><\/td><\/tr><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">Diluent:<\/th><td>70:30 Water:methanol<\/td><\/tr><td><\/td><\/tr><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">Inj. Vol.:<\/th><td>5 \u00b5L <\/td><\/tr><tr class=\"cgram_header_row\"><th class=\"conditions_header\" scope=\"row\">Mobile Phase<\/th><td><\/td><\/tr><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">A:<\/th><td>0.1% Formic acid in water <\/td><\/tr><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">B:<\/th><td>0.1% Formic acid in methanol <\/td><\/tr><tr><td><\/td><td><table class=\"cgram_ramp\"><thead><tr><th>Time (min)<\/th><th>Flow (mL\/min)<\/th><th>%A<\/th><th>%B<\/th><\/tr><\/thead><tbody><tr><td>0.00<\/td><td>0.4<\/td><td>70<\/td><td>30<\/td><\/tr><tr><td>2.50<\/td><td>0.4<\/td><td>30<\/td><td>70<\/td><\/tr><tr><td>2.51<\/td><td>0.4<\/td><td>70<\/td><td>30<\/td><\/tr><tr><td>3.50<\/td><td>0.4<\/td><td>70<\/td><td>30<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/td><\/tr><\/table><table class=\"conditions col-lg-6 col-12\"><tr><th class=\"conditions_header\" scope=\"row\">Detector<\/th><td>MS\/MS<\/td><\/tr><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">Ion Mode:<\/th><td>ESI+ <\/td><\/tr><tr><th class=\"sub conditions_header\" scope=\"row\">Mode:<\/th><td>MRM <\/td><\/tr><tr class=\"cgram_header_row\"><th class=\"conditions_header\" scope=\"row\">Instrument<\/th><td>UHPLC<\/td><\/tr><tr class=\"cgram_header_row\"><th class=\"conditions_header\" scope=\"row\">Sample Preparation<\/th><td>Human urine was fortified at 10 ng\/mL with target analytes. An 80 \u03bcL urine aliquot was mixed with 320 \u03bcL of 70:30 water:methanol solution (5-fold dilution) and 10 \u03bcL of internal standard solution (40 ng\/mL in methanol) in a Thomson SINGLE StEP filter vial (Restek cat.# 25895). After filtering through the 0.2 \u00b5m PVDF membrane, 5 \u03bcL was injected for analysis. <\/td><\/tr><\/table><\/div><\/div><\/div><div class=\"chromatogram-pdf-link\"><a href=\"https:\/\/ez.restek.com\/images\/cgram\/lc_cf0715.pdf\" target=\"_blank\" rel=\"noopener noreferrer\"><svg xmlns=\"http:\/\/www.w3.org\/2000\/svg\" width=\"18\" height=\"18\" viewBox=\"0 0 18 18\"><g data-name=\"Group 2996\"><path data-name=\"Rectangle 1246\" d=\"M0 0h18v18H0z\" style=\"fill: none;\"><\/path><\/g><g data-name=\"Group 2997\"><path data-name=\"Path 729\" d=\"M13.412 11.4v2.017H5.345V11.4H4v2.017a1.349 1.349 0 0 0 1.345 1.345h8.068a1.349 1.349 0 0 0 1.345-1.345V11.4zm-.672-2.694-.948-.948-1.741 1.735V4H8.706v5.493L6.965 7.758l-.948.948 3.361 3.361z\" transform=\"translate(-.437 -.414)\" style=\"fill: rgb(13, 123, 196);\"><\/path><\/g><\/svg>Download PDF<\/a><\/div><\/div><\/div>\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n<div style=\"height:20px\" aria-hidden=\"true\" class=\"wp-block-spacer\"><\/div>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Linearit\u00e0<\/h3>\n\n\n\n<p>Per ogni composto \u00e8 stata ottenuta una risposta lineare, con intervalli di calibrazione che includevano i livelli tipici di concentrazione monitorati a fini scientifici e per rilevare gli abusi. Usando una regressione lineare pesata 1\/x (1\/x\u00b2 nel caso del butyrylfentanyl), la linearit\u00e0 della calibrazione si \u00e8 attestata tra 0,05 e 50 ng\/mL per fentanyl, alfentanil, acetylfentanyl, butyrylfentanyl e sufentanil; tra 0,10 e 50 ng\/mL per remifentanil e tra 0,25 e 50 ng\/mL per norfentanyl e carfentanil. Tutti gli analiti hanno mostrato una linearit\u00e0 accettabile, con valori r\u00b2 pari a 0,996 o superiori (Figura 3) e deviazioni &lt;12% (&lt;20% nel caso degli standard a minore concentrazione).<\/p>\n\n\n<div class=\"wp-block-custom-chromatogram-article-top\"><div class=\"chromatogram-article-placeholder\"><div class=\"figure-heading\"><strong>Figura 3:<\/strong>\u00a0Curve di calibrazione<\/div><div class='chromatogram-article-inner-full'><div class=\"chromatogram-article-inner\">\n<style>.kb-image43350_bd8b4f-16 .kb-image-has-overlay:after{opacity:0.3;}<\/style>\n<div class=\"wp-block-kadence-image kb-image43350_bd8b4f-16\"><figure class=\"aligncenter size-large\"><img loading=\"lazy\" decoding=\"async\" width=\"783\" height=\"1024\" src=\"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/\/figure-article-CFAN2820-03-783x1024.jpg\" alt=\"\" class=\"kb-img wp-image-18938\" title=\"-\" srcset=\"https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-03-783x1024.jpg 783w, https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-03-229x300.jpg 229w, https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-03-768x1004.jpg 768w, https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-03-1175x1536.jpg 1175w, https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-03-1566x2048.jpg 1566w, https:\/\/discover.restek.com\/wp-content\/uploads\/figure-article-CFAN2820-03.jpg 1800w\" sizes=\"auto, (max-width: 783px) 100vw, 783px\" \/><\/figure><\/div>\n\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n<div style=\"height:20px\" aria-hidden=\"true\" class=\"wp-block-spacer\"><\/div>\n\n\n\n<h3 class=\"wp-block-heading\">Accuratezza e precisione<\/h3>\n\n\n\n<p>Sulla base di tre esperimenti indipendenti realizzati in diversi giorni, l\u2019accuratezza del metodo volto ad analizzare il fentanyl e i suoi analoghi \u00e8 stata dimostrata dalla percentuale dei valori di recupero, entro il 10% della concentrazione nominale di tutti i composti a ogni livello di QC. La percentuale di coefficiente di variazione si \u00e8 attestata in un intervallo compreso tra 0,5% e 8,3% e tra 3,4% e 8,4% rispettivamente per i confronti intra e interday, a dimostrazione di una precisione accettabile del metodo (Tabella II).<\/p>\n\n\n\n<p><strong>Tabella II:<\/strong>&nbsp;Risultati di accuratezza e precisione per fentanyl e composti analoghi in campioni QC di urina.<\/p>\n\n\n\n<figure class=\"wp-block-table\"><table class=\"has-fixed-layout\"><tbody><tr><td>&nbsp;<\/td><td colspan=\"3\"><strong>QC Level 1 (0.750 ng\/mL)<\/strong><\/td><td colspan=\"3\"><strong>QC Level 2 (4.00 ng\/mL)<\/strong><\/td><td colspan=\"3\"><strong>QC Level 3 (20.0 ng\/mL)<\/strong><\/td><\/tr><tr><td><strong>Analyte<\/strong><\/td><td><strong>Average Conc. (ng\/mL)<\/strong><\/td><td><strong>Average Accuracy (%)<\/strong><\/td><td><strong>%RSD<\/strong><\/td><td><strong>Average Conc. (ng\/mL)<\/strong><\/td><td><strong>Average Accuracy (%)<\/strong><\/td><td><strong>%RSD<\/strong><\/td><td><strong>Average Conc. (ng\/mL)<\/strong><\/td><td><strong>Average Accuracy (%)<\/strong><\/td><td><strong>%RSD<\/strong><\/td><\/tr><tr><td>Acetyl fentanyl<\/td><td>0.761<\/td><td>102<\/td><td>1.54<\/td><td>3.99<\/td><td>99.7<\/td><td>2.08<\/td><td>19.9<\/td><td>99.3<\/td><td>0.856<\/td><\/tr><tr><td>Alfentanil<\/td><td>0.733<\/td><td>97.6<\/td><td>3.34<\/td><td>3.96<\/td><td>98.9<\/td><td>8.38<\/td><td>20.9<\/td><td>104<\/td><td>6.73<\/td><\/tr><tr><td>Butyryl fentanyl<\/td><td>0.741<\/td><td>98.9<\/td><td>6.29<\/td><td>3.77<\/td><td>94.3<\/td><td>6.01<\/td><td>20.8<\/td><td>104<\/td><td>4.95<\/td><\/tr><tr><td>Carfentanil<\/td><td>0.757<\/td><td>101<\/td><td>7.34<\/td><td>3.76<\/td><td>94.0<\/td><td>4.64<\/td><td>20.6<\/td><td>103<\/td><td>4.24<\/td><\/tr><tr><td>Fentanyl<\/td><td>0.761<\/td><td>102<\/td><td>1.98<\/td><td>3.96<\/td><td>99.1<\/td><td>2.31<\/td><td>19.9<\/td><td>99.6<\/td><td>1.04<\/td><\/tr><tr><td>Norfentanyl<\/td><td>0.768<\/td><td>103<\/td><td>6.50<\/td><td>4.04<\/td><td>101<\/td><td>1.84<\/td><td>20.1<\/td><td>101<\/td><td>2.55<\/td><\/tr><tr><td>Remifentanil<\/td><td>0.765<\/td><td>102<\/td><td>3.42<\/td><td>3.97<\/td><td>99.2<\/td><td>3.68<\/td><td>20.8<\/td><td>104<\/td><td>4.14<\/td><\/tr><tr><td>Sufentanil<\/td><td>0.752<\/td><td>100<\/td><td>1.67<\/td><td>3.93<\/td><td>98.3<\/td><td>1.28<\/td><td>20.1<\/td><td>100<\/td><td>0.943<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n<h2 class=\"wp-block-heading\">Conclusioni<\/h2>\n\n\n\n<p>\u00c8 stato sviluppato un semplice metodo dilute-and-shoot finalizzato all\u2019analisi quantitativa del fentanyl e dei suoi analoghi nell\u2019urina umana. Il metodo analitico si \u00e8 rivelato rapido, affidabile e sensibile, presentando accuratezza e precisione accettabili per l\u2019analisi in campioni di urina. La colonna Raptor bifenilica \u00e8 particolarmente adatta all\u2019analisi di tali oppioidi sintetici e il metodo illustrato pu\u00f2 presentare diverse applicazioni: tossicologia clinica, analisi forense, test antidroga sul lavoro e ricerca farmaceutica.<\/p>\n\n\n\n<div style=\"height:50px\" aria-hidden=\"true\" class=\"wp-block-spacer\"><\/div>\n\n\n        <div class=\"cpb\">\n            <h3 class=\"cpb-heading\">Products Mentioned<\/h3>\n            <hr class=\"cpb-heading-underline\" \/>\n            <div class=\"cpb-list\">\n                                    <div class=\"cpb-item\">\n                        <div class=\"cpb-col cpb-col--left\">\n                            <a class=\"cpb-catalog\" target=\"_blank\" rel=\"noopener noreferrer\" href=\"https:\/\/www.restek.com\/p\/9309552\">                                Catalog No. 9309552                            <\/a>                        <\/div>\n                        <div class=\"cpb-col cpb-col--middle\">\n                            <div class=\"cpb-title\">Colonna HPLC Raptor bifenilica, 5 \u00b5m, 50 x 2,1 mm<\/div>\n                        <\/div>\n                        <div class=\"cpb-col cpb-col--right\">\n                                                            <a class=\"cpb-view-btn\" target=\"_blank\" rel=\"noopener noreferrer\" href=\"https:\/\/www.restek.com\/p\/9309552\">Esplora Prodotto<\/a>\n                                                    <\/div>\n                    <\/div>\n                                    <div class=\"cpb-item\">\n                        <div class=\"cpb-col cpb-col--left\">\n                            <a class=\"cpb-catalog\" target=\"_blank\" rel=\"noopener noreferrer\" href=\"https:\/\/www.restek.com\/p\/930950252\">                                Catalog No. 930950252                            <\/a>                        <\/div>\n                        <div class=\"cpb-col cpb-col--middle\">\n                            <div class=\"cpb-title\">Cartuccia per precolonna Raptor bifelinica EXP, 5 \u00b5m, 5 x 2.1 mm, 3 pz.<\/div>\n                        <\/div>\n                        <div class=\"cpb-col cpb-col--right\">\n                                                            <a class=\"cpb-view-btn\" target=\"_blank\" rel=\"noopener noreferrer\" href=\"https:\/\/www.restek.com\/p\/930950252\">Esplora Prodotto<\/a>\n                                                    <\/div>\n                    <\/div>\n                            <\/div>\n        <\/div>\n        \n\n\n<div style=\"height:100px\" aria-hidden=\"true\" class=\"wp-block-spacer\"><\/div>\n","protected":false},"excerpt":{"rendered":"<p>Gli oppioidi sintetici, come il fentanil e il sufentanil, hanno una potenza analgesica molto elevata. L&#8217;abuso di questi antidolorifici da prescrizione, insieme a un elenco in rapida crescita di analoghi illeciti, rappresenta un problema significativo per la salute pubblica. In questo studio, abbiamo sviluppato un semplice metodo di diluizione e ripresa che fornisce una rapida analisi di 3,5 minuti del fentanil e dei composti correlati (norfentanil, acetil fentanil, alfentanil, butirril fentanil, carfentanil, remifentanil e sufentanil) nell&#8217;urina umana mediante LC-MS\/MS utilizzando una colonna Raptor Biphenyl.<\/p>\n","protected":false},"author":46,"featured_media":6349,"comment_status":"closed","ping_status":"open","sticky":false,"template":"","format":"standard","meta":{"_acf_changed":false,"_kad_blocks_custom_css":"","_kad_blocks_head_custom_js":"","_kad_blocks_body_custom_js":"","_kad_blocks_footer_custom_js":"","_kadence_starter_templates_imported_post":false,"_kad_post_transparent":"","_kad_post_title":"","_kad_post_layout":"","_kad_post_sidebar_id":"","_kad_post_content_style":"","_kad_post_vertical_padding":"","_kad_post_feature":"","_kad_post_feature_position":"","_kad_post_header":false,"_kad_post_footer":false,"footnotes":""},"categories":[784],"tags":[],"industries-application":[2245,2262,2260,2248,2261],"post-badge":[],"resource-type":[],"product-library":[2535,2517,2519,2546,2549],"resource-technique":[2334,2364],"ppma_author":[578,586],"class_list":["post-43350","post","type-post","status-publish","format-standard","has-post-thumbnail","hentry","category-application-notes-it","industries-application-clinico","industries-application-farmaceutico-biofarmaceutico","industries-application-forense","industries-application-tossicologia-clinica","industries-application-tossicologia-forense","product-library-colonne-lc","product-library-prodotti-per-cromatografia-liquida","product-library-prodotti-per-la-preparazione-del-campione","product-library-spe-sle-prodotti","product-library-vial-accessori","resource-technique-cromatografia-liquida-lc","resource-technique-ms-ms-it"],"acf":[],"taxonomy_info":{"category":[{"value":784,"label":"Application Notes"}],"industries-application":[{"value":2245,"label":"Clinico"},{"value":2262,"label":"Farmaceutico e Biofarmaceutico"},{"value":2260,"label":"Forense"},{"value":2248,"label":"Tossicologia Clinica"},{"value":2261,"label":"Tossicologia Forense"}],"product-library":[{"value":2535,"label":"Colonne LC"},{"value":2517,"label":"Prodotti per Cromatografia Liquida"},{"value":2519,"label":"Prodotti per la Preparazione del Campione"},{"value":2546,"label":"SPE &amp; 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