{"id":45313,"date":"2020-10-28T00:00:00","date_gmt":"2020-10-28T00:00:00","guid":{"rendered":"https:\/\/discover.restek.com\/uncategorized\/lanalisi-di-pesticidi-e-micotossine-nei-brownie-alla-cannabis\/"},"modified":"2026-01-28T22:06:37","modified_gmt":"2026-01-28T22:06:37","slug":"lanalisi-di-pesticidi-e-micotossine-nei-brownie-alla-cannabis","status":"publish","type":"post","link":"https:\/\/discover.restek.com\/it\/application-notes-it\/ffan3149-it\/lanalisi-di-pesticidi-e-micotossine-nei-brownie-alla-cannabis","title":{"rendered":"L\u2019analisi di pesticidi e micotossine nei brownie alla cannabis"},"content":{"rendered":"\n

Abstract<\/h2>\n\n\n\n

I regolamenti governativi della California impongono all\u2019industria della cannabis di sottoporre i prodotti alimentari all\u2019analisi di una lunga lista di pesticidi e micotossine. Nel presente studio \u00e8 stato sviluppato un flusso di lavoro efficace per eseguire questa analisi complessa sui brownie, e vengono illustrate in dettaglio alcune strategie di ottimizzazione volte a fornire un punto di partenza per matrici simili. Sono stati impiegati i metodi LC-MS\/MS e GC-MS\/MS e per tutti i composti target sono stati raggiunti eccellenti risultati a livello di LOQ, linearit\u00e0, accuratezza e precisione.<\/p>\n\n\n\n

Introduzione<\/h2>\n\n\n\n

La legalizzazione della cannabis (marijuana) per scopi ricreativi e medici richiede metodi analitici accurati e affidabili per valutare la qualit\u00e0 e la sicurezza di qualsiasi prodotto derivato dalla cannabis. Per sviluppare metodi efficaci occorre considerare attentamente le propriet\u00e0 degli analiti e gli effetti della matrice, e le analisi sono ulteriormente complicate dal fatto che i requisiti variano a seconda del Paese e dei diversi tipi di prodotto. Tra i numerosi prodotti a base di cannabis disponibili in commercio, quelli commestibili rappresentano una delle categorie pi\u00f9 diffuse e comprendono un\u2019ampia variet\u00e0 di prodotti, quali diversi tipi di bevande, cioccolatini, prodotti da forno e caramelle, solo per citarne alcuni. Attualmente lo stato della California richiede l\u2019analisi di una lunga lista di pesticidi e micotossine non solo nel fiore di cannabis, ma anche nei prodotti derivati da questa pianta [1]. Per questa ragione, \u00e8 fondamentale elaborare metodi in grado di affrontare le sfide poste dai diversi tipi di matrice.<\/p>\n\n\n\n

Questo articolo descrive lo sviluppo di un metodo di test per l\u2019analisi di pesticidi e micotossine nei brownie alla cannabis in base alla lista stilata dal governo californiano. Abbiamo scelto i brownie come matrice modello in quanto sono molto diffusi tra i consumatori di prodotti alimentari a base di cannabis, ma anche perch\u00e9 contengono livelli elevati di potenziali interferenze (carboidrati e grassi). Illustreremo il lavoro di sviluppo che abbiamo dovuto effettuare per ottimizzare il metodo per l\u2019analisi dei brownie, che proponiamo come punto di riferimento per laboratori che sviluppano metodi per prodotti alimentari simili (per esempio, biscotti o altri prodotti da forno). Il metodo finale qui stabilito per l\u2019analisi di pesticidi e micotossine nei brownie alla cannabis ha fornito risultati eccellenti in termini di linearit\u00e0, accuratezza, precisione e limiti di quantificazione (limit of quantification, LOQ).<\/p>\n\n\n\n

Studio sperimentale<\/h2>\n\n\n\n

Inizialmente \u00e8 stato eseguito un lavoro di sviluppo del metodo per ottimizzare la procedura di preparazione dei campioni e per valutare l\u2019impatto degli effetti della matrice sull\u2019analisi quantitativa. L\u2019esito di tali esperimenti viene discusso nella sezione dedicata ai risultati, e viene qui presentata la metodologia finale raccomandata per l\u2019analisi di pesticidi e micotossine nei brownie alla cannabis.<\/p>\n\n\n\n

Preparazione del campione<\/h3>\n\n\n\n

Per un campione solido come i brownie, la prima fase della preparazione del campione \u00e8 l\u2019omogeneizzazione della matrice. Per ridurre il campione in polvere molto fine abbiamo utilizzato un mulino SPEX Freezer\/Mill. I campioni sono stati preraffreddati per 2 minuti, e dopo tre cicli da 2 minuti ciascuno di triturazione (a 15 cps) e 1 minuto di raffreddamento \u00e8 stata ottenuta una polvere sfusa e omogenea facile da lavorare. (In alternativa si potrebbe utilizzare un robot da cucina con ghiaccio secco).<\/p>\n\n\n\n

Per il bianco \u00e8 stata pesata una matrice di brownie polverizzata (0,5 g) in un vial di vetro da 4,0 mL (cat.#\u00a024654) e fortificata con pesticidi e micotossine ai livelli definiti nella Tabella I. Una miscela di standard interni \u00e8 stata aggiunta a 200 ng\/g (composti elencati nella Tabella\u202fII). 1,5 mL di acetonitrile acidificato con 1% di acido acetico \u00e8 stato aggiunto al campione. Il campione \u00e8 stato vortexato e sonicato per 5\u202fminuti (non \u00e8 stata necessaria la centrifuga), quindi il surnatante \u00e8 stato fatto passare attraverso una cartuccia SPE Resprep C18 da 100\u202fmg (cat.#\u00a026030). Al pellet del campione sono stati aggiunti ulteriori 1,5 mL di solvente di estrazione (acetonitrile acidificato) e poi il campione \u00e8 stato vortexato di nuovo. Il surnatante \u00e8 stato fatto passare attraverso la stessa cartuccia C18.<\/p>\n\n\n\n

Per l\u2019analisi LC-MS\/MS, 750 \u00b5L di surnatante sono stati miscelati a 250 \u00b5L di acqua e il tutto \u00e8 stato poi centrifugato per 5 minuti a bassa temperatura (~7 \u2070C). Un\u2019aliquota di 2 \u03bcL di estratto finale \u00e8 stata iniettata nel sistema LC-MS\/MS.<\/p>\n\n\n\n

Per l\u2019analisi GC-MS\/MS, il surnatante rimanente \u00e8 stato trasferito in una provetta Q-sep QuEChERS dSPE contenente solfato di magnesio e PSA pre-pesati (cat.#\u00a026215). Dopo il passaggio al vortex e la centrifuga, 500 \u03bcL di estratti sono stati miscelati a 500 \u03bcL di acetonitrile acidificato. Un\u2019aliquota di 1 \u03bcL di estratto finale \u00e8 stata iniettata nel sistema GC-MS\/MS.<\/p>\n\n\n\n

Standard di calibrazione e campioni di controllo qualit\u00e0 (QC)<\/h3>\n\n\n\n

Una curva di calibrazione a nove punti con un range compreso tra 5 e 700 ng\/g \u00e8 stata preparata in triplicato nella matrice per valutare la linearit\u00e0 e consentire l\u2019analisi quantitativa. Per valutare l\u2019accuratezza e la precisione del metodo, sono stati preparati in quadruplicato tre diversi livelli di concentrazione QC (10, 100, e 500 ng\/g). Sia per gli standard di calibrazione che per i campioni QC, per il bianco sono stati pesati 0,5 g di matrice di brownie polverizzata in un vial di vetro da 4 mL. Nella Tabella I sono riportati i \u00b5L di soluzione madre aggiunti a ogni vial per ottenere concentrazioni diverse nella matrice.<\/p>\n\n\n\n

Tabella I<\/strong>: Preparazione dello standard di calibrazione e livelli di concentrazione dei campioni QC.<\/p>\n\n\n\n

Description<\/strong><\/th>Concentration in
Matrix (ng\/g)<\/strong><\/th>		Volume of Fortification
Solution Added (\u00b5L)<\/strong><\/th>		Concentration of
Fortification Solution (ng\/mL)<\/strong><\/th><\/tr><\/thead>
Calibration 1<\/td>5<\/td>10<\/td>250<\/td><\/tr>
QC Low<\/td>10<\/td>20<\/td>250<\/td><\/tr>
Calibration 2<\/td>25<\/td>50<\/td>250<\/td><\/tr>
Calibration 3<\/td>50<\/td>25<\/td>1000<\/td><\/tr>
Calibration 4<\/td>75<\/td>37.5<\/td>1000<\/td><\/tr>
QC Medium<\/td>100<\/td>50<\/td>1000<\/td><\/tr>
Calibration 5<\/td>150<\/td>15<\/td>5000<\/td><\/tr>
Calibration 6<\/td>200<\/td>20<\/td>5000<\/td><\/tr>
Calibration 7<\/td>300<\/td>30<\/td>5000<\/td><\/tr>
Calibration 8<\/td>400<\/td>40<\/td>5000<\/td><\/tr>
QC High<\/td>500  <\/td>50<\/td>5000<\/td><\/tr>
Calibration 9<\/td>700<\/td>70<\/td>5000<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n

Tabella II<\/strong>: Standard interni (ISTD) e composti target per analisi LC (per l\u2019analisi GC illustrata nella Figura 2 \u00e8 stata utilizzata atrazina-D5)<\/p>\n\n\n\n

Compound<\/strong><\/td>Type<\/strong><\/td>ISTD Group<\/strong><\/td><\/tr>
Daminozide-D6<\/td>ISTD<\/td>8<\/td><\/tr>
Daminozide<\/td>Target<\/td>8<\/td><\/tr>
Acephate<\/td>Target<\/td>3<\/td><\/tr>
Oxamyl<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Flonicamid<\/td>Target<\/td>3<\/td><\/tr>
Methomyl<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Thiamethoxam<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Imidacloprid<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Mevinphos I<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Mevinphos II<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Acetamiprid<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Dimethoathe-D6<\/td>ISTD<\/td>3<\/td><\/tr>
Dimethoate<\/td>Target<\/td>3<\/td><\/tr>
Thiacloprid<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Aldicarb<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Dichlorvos<\/td>Target<\/td>4<\/td><\/tr>
Dichlorvos-D6<\/td>ISTD<\/td>4<\/td><\/tr>
Imazalil<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Carbofuran<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Propoxur<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Carbaryl-D7<\/td>ISTD<\/td>5<\/td><\/tr>
Carbaryl<\/td>Target<\/td>5<\/td><\/tr>
Diuron-D6<\/td>ISTD<\/td>2<\/td><\/tr>
Atrazine-D5<\/td>ISTD<\/td>7<\/td><\/tr>
Naled<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Metalaxyl<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Spiroxamin<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Chlorantraniliprole<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Phosmet<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Azoxystrobin<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Linuron-D6<\/td>ISTD<\/td>1<\/td><\/tr>
Fludioxonil<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Methiocarb<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Boscalid<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Dimethomorph I<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Paclobutrazol<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Dimethomorph II<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Malathion<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Myclobutanil<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Bifenazate<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Fenhexamid<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Spirotetramat<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Fipronil<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Ethoprophos<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Fenoxycarb<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Kresoxim methyl<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Tebuconazole<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Diazinon-D10<\/td>ISTD<\/td>6<\/td><\/tr>
Diazinon<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Spinosad A<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Pyridaben<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Coumaphos<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Propiconazole<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Clofentezine<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Spinosad (Spinosyn D)<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Spinetoram (Spinosyn J)<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Prallethrin<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Trifloxystrobin<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Pyrethrin II<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Spinetoram (Spinosyn L)<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Piperonyl butoxide<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Chlorpyrifos<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Hexythiazox<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Etoxazole<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Spiromesifen<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Pyrethrin I<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Cyfluthrin<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Fenpyroximate<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Cypermethrin<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Abamectine<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Permethrin-trans<\/em><\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Permethrin-cis<\/em><\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Etofenprox<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Bifenthrin<\/td>Target<\/td>2<\/td><\/tr>
Acequinocyl 343<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Acequinocyl 402<\/td>Target<\/td>6<\/td><\/tr>
Aflatoxin G2<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Aflatoxin G1<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Aflatoxin B2<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Ochratoxin A<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr>
Aflatoxin B1<\/td>Target<\/td>1<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/figure>\n\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n

Parametri dello strumento<\/h3>\n\n\n\n

L\u2019analisi LC-MS\/MS di pesticidi e micotossine nei brownie alla cannabis \u00e8 stata effettuata utilizzando una colonna analitica Raptor ARC-18 da 2,7\u202f\u00b5m x 100\u202fmm x 2,1 mm (cat.#\u00a09314A12) e uno Shimadzu LCMS-8060 LC-MS\/MS. I parametri generali dello strumento, la polarit\u00e0 ESI di ciascun composto e le transizioni degli analiti sono riportati nella Figura 1.<\/p>\n\n\n\n

L\u2019analisi GC-MS\/MS \u00e8 stata effettuata utilizzando una colonna analitica Rxi-5ms (cat.#\u00a013423) da 30\u202fm x 0,25\u202fmm x 0,25 \u00b5m e un Thermo Scientific TSQ 8000 Triple Quadrupole GC-MS\/MS. I parametri dello strumento e le transizioni degli analiti sono riportati nella Figura 2. Si noti che per questa applicazione \u00e8 stato importante utilizzare un liner a cono singolo con lana (cat.#\u00a023447). L\u2019impaccamento in lana aumenta la vaporizzazione e la miscelazione\/omogeneizzazione con il carrier gas per una migliore riproducibilit\u00e0, e il cono nella parte inferiore del liner incanala gli analiti nella colonna, riducendo le potenziali interazioni con la guarnizione dell\u2019iniettore. Inoltre, \u00e8 stato impiegato un tempo di mantenimento di 10 min alla fine di ciascuna corsa per evitare il carry over dei composti e interferenze con le analisi successive.<\/p>\n\n\n\n

Risultati e discussione<\/h2>\n\n\n\n

Prestazione cromatograficaPer coprire tutti i composti regolati dallo stato di California abbiamo sviluppato i metodi LC-MS\/MS e GC-MS\/MS. Sebbene sia facile analizzare la maggioranza dei pesticidi utilizzando il metodo LC-MS\/MS, i pesticidi idrofobici, quali il chlordane, il methyl parathion, il captan, il chlorfenapyr, e il pentachloronitrobenzene (PCNB), non possono essere rilevati o sono scarsamente ionizzati in condizioni di ionizzazione elettrospray. Altri pesticidi, come il cyfluthrin e la cypermethrin, hanno invece una scarsa risposta in modalit\u00e0 ESI, ma possono essere analizzati sia il metodo strumentale GC-MS\/MS che LC-MS\/MS Al fine di ottenere una risposta ESI accettabile per questi due analiti, le temperature della sorgente di ionizzazione dovrebbero essere impostate su valori relativi bassi. Nel nostro caso, le temperature dell\u2019interfaccia, della linea di desolvatazione e del blocco riscaldante sono state tutte impostate a 100\u202f\u00b0C. In questo studio, chlordane, methyl parathion, captan, chlorfenapyr, and pentachloronitrobenzene (PCNB) sono stati analizzati utilizzando GC-MS\/MS; mentre cyfluthrin e cypermethrin sono stati analizzati utilizzando entrambi gli strumenti, e il resto dei pesticidi e delle micotossine \u00e8 stato analizzato utilizzando solo il metodo LC-MS\/MS. Le Figure 1 e 2 mostrano rispettivamente i cromatogrammi LC e GC per gli analiti target. Uno dei principali vantaggi delle nostre condizioni di gradiente LC \u00e8 che tutte le micotossine eluiscono in 2,4 – 3,6 minuti, mentre i principali cannabinoidi, quali CBD, CBG, CBN, THC, e THCA-A, cominciano a eluire dopo 5,6 minuti. In base a un confronto con uno standard misto di cannabinoidi analizzati alle stesse condizioni impiegate qui, le uniche coeluizioni tra gli analiti target e i principali cannabinoidi sarebbero tra CBD e piperonyl butoxide (5.7 min), CBG e chlorpyrifos (5.8), e cyfluthrin e CBN (6.5 min). In nessun composto target ci sono state coeluizioni tra THC (delta 8 e 9) e THCA-A.<\/p>\n\n\n

Figura 1:<\/strong>\u00a0Analisi LC-MS\/MS di pesticidi e micotossine nei brownie alla cannabis.<\/div>
\n
\"California<\/div>

LC_GN0602<\/p>

Peaks<\/h4>\n
<\/th>Peaks<\/th>tR<\/sub> (min)<\/th>Precursor Ion<\/th>Product Ion 1<\/th>Product Ion 2<\/th>Polarity<\/th><\/tr><\/thead>\n
1.<\/td>Daminozide-d6<\/td>0.6<\/td>167.0<\/td>149.3<\/td>49.3<\/td>+<\/td><\/tr>\n
2.<\/td>Daminozide<\/a><\/td>0.7<\/td>161.1<\/td>44.1<\/td>143.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
3.<\/td>Acephate<\/a><\/td>1.5<\/td>184.0<\/td>143.1<\/td>95.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
4.<\/td>Oxamyl<\/a><\/td>1.8<\/td>237.1<\/td>72.1<\/td>90.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
5.<\/td>Flonicamid<\/a><\/td>1.9<\/td>230.1<\/td>203.1<\/td>174.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
6.<\/td>Methomyl<\/a><\/td>1.9<\/td>163.1<\/td>88.1<\/td>106.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
7.<\/td>Thiamethoxam<\/a><\/td>1.9<\/td>292.0<\/td>211.1<\/td>181.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
8.<\/td>Imidacloprid<\/a><\/td>2.2<\/td>256.1<\/td>209.1<\/td>175.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
9.<\/td>Mevinphos I<\/a><\/td>2.2<\/td>225.1<\/td>127.1<\/td>193.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
10.<\/td>Acetamiprid<\/a><\/td>2.2<\/td>223.0<\/td>126.1<\/td>56.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
11.<\/td>Dimethoathe-d6<\/td>2.2<\/td>236.1<\/td>205.1<\/td>–<\/td>+<\/td><\/tr>\n
12.<\/td>Dimethoate<\/a><\/td>2.3<\/td>230.0<\/td>199.1<\/td>125.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
13.<\/td>Thiacloprid<\/a><\/td>2.4<\/td>253.0<\/td>126.0<\/td>90.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
14.<\/td>Mevinphos II<\/a><\/td>2.4<\/td>225.1<\/td>127.1<\/td>193.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
15.<\/td>Aflatoxin G2<\/a><\/td>2.4<\/td>331.2<\/td>189.3<\/td>115.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
16.<\/td>Aflatoxin G1<\/a><\/td>2.4<\/td>329.2<\/td>243.2<\/td>215.3<\/td>+<\/td><\/tr>\n
17.<\/td>Aldicarb<\/a><\/td>2.5<\/td>116.0<\/td>89.2<\/td>70.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
18.<\/td>Aflatoxin B2<\/a><\/td>2.5<\/td>315.3<\/td>287.2<\/td>243.3<\/td>+<\/td><\/tr>\n
19.<\/td>Dichlorvos<\/a><\/td>2.6<\/td>220.9<\/td>109.1<\/td>79.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
20.<\/td>Dichlorvos-d6<\/td>2.6<\/td>227.0<\/td>115.1<\/td>–<\/td>+<\/td><\/tr>\n
21.<\/td>Aflatoxin B1<\/a><\/td>2.6<\/td>313.2<\/td>241.2<\/td>128.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
22.<\/td>Imazalil<\/a><\/td>2.6<\/td>297.0<\/td>159.0<\/td>201.0<\/td>+<\/td><\/tr>\n
23.<\/td>Carbofuran<\/a><\/td>2.6<\/td>222.1<\/td>123.1<\/td>165.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
24.<\/td>Propoxur<\/a><\/td>2.6<\/td>210.1<\/td>111.1<\/td>93.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
25.<\/td>Carbaryl-d7<\/td>2.7<\/td>209.2<\/td>152.2<\/td>–<\/td>+<\/td><\/tr>\n
26.<\/td>Carbaryl<\/a><\/td>2.7<\/td>202.1<\/td>145.1<\/td>127.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
27.<\/td>Diuron-d6<\/td>2.9<\/td>239.1<\/td>78.2<\/td>–<\/td>+<\/td><\/tr>\n
28.<\/td>Atrazine-d5<\/a><\/td>2.9<\/td>221.2<\/td>179.1<\/td>–<\/td>+<\/td><\/tr>\n
29.<\/td>Naled<\/a><\/td>2.9<\/td>397.8<\/td>127.1<\/td>109.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
30.<\/td>Metalaxyl<\/a><\/td>2.9<\/td>280.2<\/td>220.2<\/td>192.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
31.<\/td>Spiroxamine<\/a><\/td>2.9<\/td>298.3<\/td>144.2<\/td>100.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
32.<\/td>Chlorantraniliprole<\/a><\/td>3.0<\/td>483.9<\/td>452.9<\/td>285.9<\/td>+<\/td><\/tr>\n
33.<\/td>Phosmet<\/a><\/td>3.0<\/td>318.0<\/td>160.1<\/td>77.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
34.<\/td>Azoxystrobin<\/a><\/td>3.1<\/td>404.0<\/td>372.1<\/td>344.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
35.<\/td>Linuron-d6<\/a><\/td>3.1<\/td>255.1<\/td>160.1<\/td>–<\/td>+<\/td><\/tr>\n
36.<\/td>Fludioxonil<\/a><\/td>3.2<\/td>247.0<\/td>180.0<\/td>126.0<\/td>–<\/td><\/tr>\n
37.<\/td>Methiocarb<\/a><\/td>3.2<\/td>226.1<\/td>169.1<\/td>121.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
38.<\/td>Dimethomorph I<\/a><\/td>3.2<\/td>388.2<\/td>301.2<\/td>165.3<\/td>+<\/td><\/tr>\n
39.<\/td>Boscalid<\/a><\/td>3.2<\/td>342.9<\/td>307.1<\/td>140.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
40.<\/td>Paclobutrazol<\/a><\/td>3.3<\/td>294.3<\/td>70.1<\/td>125.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
41.<\/td>Malathion<\/a><\/td>3.3<\/td>331.0<\/td>127.2<\/td>285.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
42.<\/td>Dimethomorph II<\/a><\/td>3.4<\/td>388.2<\/td>301.2<\/td>165.3<\/td>+<\/td><\/tr>\n
43.<\/td>Myclobutanil<\/a><\/td>3.4<\/td>289.1<\/td>70.1<\/td>125.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
44.<\/td>Bifenazate<\/a><\/td>3.4<\/td>301.0<\/td>198.1<\/td>170.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
45.<\/td>Ochratoxin A<\/a><\/td>3.5<\/td>404.2<\/td>239.1<\/td>358.3<\/td>+<\/td><\/tr>\n
46.<\/td>Fenhexamid<\/a><\/td>3.5<\/td>302.1<\/td>97.1<\/td>55.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
47.<\/td>Spirotetramat<\/a><\/td>3.7<\/td>374.2<\/td>302.1<\/td>216.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
48.<\/td>Ethoprophos<\/a><\/td>3.8<\/td>243.1<\/td>131.1<\/td>97.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
49.<\/td>Fipronil<\/a><\/td>3.8<\/td>436.8<\/td>331.8<\/td>251.9<\/td>–<\/td><\/tr>\n
50.<\/td>Fenoxycarb<\/a><\/td>3.9<\/td>302.1<\/td>88.1<\/td>116.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
51.<\/td>Kresoxim-methyl<\/a><\/td>4.1<\/td>314.2<\/td>267.2<\/td>222.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
52.<\/td>Tebuconazole<\/a><\/td>4.2<\/td>308.1<\/td>70.1<\/td>125.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
53.<\/td>Diazinon-d10 <\/td>4.2<\/td>315.2<\/td>170.2<\/td>–<\/td>+<\/td><\/tr>\n
54.<\/td>Spinosyn A (spinosad)<\/a><\/td>4.3<\/td>732.4<\/td>142.2<\/td>98.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
55.<\/td>Diazinon<\/a><\/td>4.3<\/td>305.1<\/td>169.2<\/td>153.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
56.<\/td>Coumaphos<\/a><\/td>4.4<\/td>363.1<\/td>227.1<\/td>307.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
57.<\/td>Pyridaben<\/a><\/td>4.4<\/td>365.1<\/td>309.2<\/td>147.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
58.<\/td>Propiconazole<\/a><\/td>4.4<\/td>342.0<\/td>159.0<\/td>69.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
59.<\/td>Clofentezine<\/a><\/td>4.5<\/td>303.0<\/td>138.1<\/td>102.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
60.<\/td>Spinosyn D (spinosad)<\/a><\/td>4.8<\/td>746.5<\/td>142.3<\/td>98.4<\/td>+<\/td><\/tr>\n
61.<\/td>Spinosyn J (spinetoram)<\/a><\/td>4.8<\/td>748.5<\/td>142.3<\/td>98.3<\/td>+<\/td><\/tr>\n
62.<\/td>Trifloxystrobin<\/a><\/td>4.9<\/td>409.2<\/td>186.1<\/td>145.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
63.<\/td>Prallethrin<\/a><\/td>4.9<\/td>301.2<\/td>123.2<\/td>105.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
64.<\/td>Pyrethrin II<\/a><\/td>5.2<\/td>373.1<\/td>161.1<\/td>133.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
65.<\/td>Spinosyn L (spinetoram)<\/a><\/td>5.4<\/td>760.5<\/td>142.2<\/td>98.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
66.<\/td>Piperonyl butoxide<\/a><\/td>5.7<\/td>356.3<\/td>177.2<\/td>119.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
67.<\/td>Chlorpyrifos<\/a><\/td>5.8<\/td>349.9<\/td>198.0<\/td>97.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
68.<\/td>Hexythiazox<\/a><\/td>5.9<\/td>353.1<\/td>228.1<\/td>168.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
69.<\/td>Etoxazole<\/a><\/td>6.4<\/td>360.2<\/td>141.1<\/td>304.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
70.<\/td>Spiromesifen<\/a><\/td>6.4<\/td>273.2<\/td>255.2<\/td>187.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
71.<\/td>Pyrethrin I<\/a><\/td>6.6<\/td>329.2<\/td>161.2<\/td>105.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
72.<\/td>Cyfluthrin (qualifier)<\/a><\/td>6.6<\/td>453.1<\/td>193.2<\/td>–<\/td>+<\/td><\/tr>\n
73.<\/td>Cyfluthrin<\/a><\/td>6.6<\/td>451.1<\/td>191.2<\/td>–<\/td>+<\/td><\/tr>\n
74.<\/td>Cypermethrin<\/a><\/td>6.8<\/td>433.1<\/td>191.0<\/td>416.0<\/td>+<\/td><\/tr>\n
75.<\/td>(E)-Fenpyroximate<\/a><\/td>6.8<\/td>422.2<\/td>366.1<\/td>138.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
76.<\/td>trans-Permethrin<\/a><\/td>7.4<\/td>408.3<\/td>183.2<\/td>355.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
77.<\/td>cis-Permethrin<\/a><\/td>7.7<\/td>408.3<\/td>183.2<\/td>355.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n
78.<\/td>Avermectin B1a<\/a><\/td>7.7<\/td>890.5<\/td>305.4<\/td>567.4<\/td>+<\/td><\/tr>\n
79.<\/td>Etofenprox<\/a><\/td>7.8<\/td>394.3<\/td>177.2<\/td>359.3<\/td>+<\/td><\/tr>\n
80.<\/td>Bifenthrin<\/a><\/td>8.0<\/td>440.0<\/td>181.2<\/td>166.2<\/td>+<\/td><\/tr>\n
81.<\/td>Acequinocyl (precursor ion 1)<\/a><\/td>9.3<\/td>402.3<\/td>343.2<\/td>189.0<\/td>+<\/td><\/tr>\n
82.<\/td>Acequinocyl (precursor ion 2)<\/a><\/td>9.3<\/td>386.0<\/td>344.2<\/td>189.1<\/td>+<\/td><\/tr>\n<\/tbody><\/table><\/div>

Conditions<\/h4>
Column<\/th>Raptor ARC-18 (cat.# 9314A12<\/a>)<\/td><\/tr>
Dimensions:<\/th>100 mm x 2.1 mm ID<\/td><\/tr>
Particle Size:<\/th>2.7 \u00b5m<\/td><\/tr>
Pore Size:<\/th>90 \u00c5<\/td><\/tr>
<\/td>
Guard Column:<\/th>Raptor ARC-18 EXP guard column cartridge 5 mm, 2.1 mm ID, 2.7 \u00b5m (cat.# 9314A0252<\/a>)<\/td><\/tr>
Temp.:<\/th>40 \u00b0C<\/td><\/tr>
Standard\/Sample<\/th><\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #1 (cat.# 34124<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #2 (cat.# 34125<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #3 (cat.# 34126<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #4 (cat.# 34127<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #5 (cat.# 34128<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #6 (cat.# 34129<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Dimethoate-d6 (cat.# 31988<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Dichlorvos-d6 (cat.# 31987<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Carbaryl-d7 (cat.# 31985<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Diazinon-d10 (cat.# 31986<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Atrazine-d5 (cat.# 31984<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Diuron-d6 (cat.# 31989<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Liuron-d6 (cat.# 31990<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Aflatoxins standard (cat.# 34121<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Ochratoxin A (cat.# 34122<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Compounds not present in these mixes were obtained separately.<\/td><\/tr>\n
Diluent:<\/th>75:25 Acetonitrile:water<\/td><\/tr>
Conc.:<\/th>5-15 ng\/mL (Expected concentration range in extract of brownie initially spiked at 100 ng\/g.)<\/td><\/tr><\/td><\/tr>
Inj. Vol.:<\/th>2 \u00b5L <\/td><\/tr>
Mobile Phase<\/th><\/td><\/tr>
A:<\/th>Water, 2 mM ammonium formate, 0.1% formic acid <\/td><\/tr>
B:<\/th>Methanol, 2 mM ammonium formate, 0.1% formic acid <\/td><\/tr>
<\/td>
Time (min)<\/th>Flow (mL\/min)<\/th>%A<\/th>%B<\/th><\/tr><\/thead>
0.00<\/td>0.5<\/td>95<\/td>5<\/td><\/tr>
1.5<\/td>0.5<\/td>35<\/td>65<\/td><\/tr>
8.5<\/td>0.5<\/td>5<\/td>95<\/td><\/tr>
9.5<\/td>0.5<\/td>0<\/td>100<\/td><\/tr>
10.5<\/td>0.5<\/td>0<\/td>100<\/td><\/tr>
10.6<\/td>0.5<\/td>95<\/td>5<\/td><\/tr>
12<\/td>0.5<\/td>95<\/td>5<\/td><\/tr><\/tbody><\/table><\/td><\/tr><\/table>
Detector<\/th>MS\/MS<\/td><\/tr>
Ion Mode:<\/th>ESI+\/ESI- <\/td><\/tr>
Mode:<\/th>MRM <\/td><\/tr>
Instrument<\/th>UHPLC<\/td><\/tr>
Sample Preparation<\/th>Brownies were pulverized using a SPEX Freezer\/Mill grinder and 0.5 g samples were fortified with pesticides and mycotoxins at 100 ng\/g. A mix of internal standards was added at 200 ng\/g. 1.5 mL of acetonitrile acidified with 1% acetic acid was added to the sample. The sample was vortexed and sonicated for 5 min, and then the supernatant was passed through a 100 mg Resprep C18 SPE cartridge (cat.# 26030<\/a>). An additional 1.5 mL of extraction solvent (acidified acetonitrile) was added to the sample pellet, and then the sample was vortexed again. The supernatant was passed through the same C18 cartridge. 750 \u00b5L of extract was mixed with 250 \u00b5L of water, and then centrifuged for 5 min at low temperature (~7 \u2070C). 2 \u03bcL of final extract was injected into the LC-MS\/MS system.<\/td><\/tr>
Notes<\/th>Want even better performance when analyzing metal-sensitive compounds? Check out Inert LC columns at www.restek.com\/inert<\/a>.<\/td><\/tr><\/table><\/div><\/div><\/div>
<\/path><\/g><\/path><\/g><\/svg>Download PDF<\/a><\/div><\/div><\/div>\n<\/div><\/div><\/div>\n\n
Figura 2:<\/strong>\u00a0Analisi GC MS\/MS di pesticidi e micotossine nei brownie alla cannabis.<\/div>
\n
\"GC<\/div>

GC_GN1206<\/p>

Peaks<\/h4>\n
<\/th>Peaks<\/th>tR<\/sub> (min)<\/th>Polarity<\/th>Precursor Ion<\/th>Product Ion<\/th>Transition Type<\/th><\/tr><\/thead>\n
1.<\/td>Atrazine-D5<\/a><\/td>7.5<\/td>Positive<\/td>220.0<\/td>58.0<\/td>Quantifier<\/td><\/tr>\n
2.<\/td>Atrazine-D5<\/a><\/td>7.5<\/td>Positive<\/td>205.0<\/td>127.0<\/td>Qualifier<\/td><\/tr>\n
3.<\/td>Quintozene<\/a><\/td>7.8<\/td>Positive<\/td>294.9<\/td>236.9<\/td>Quantifier<\/td><\/tr>\n
4.<\/td>Quintozene<\/a><\/td>7.8<\/td>Positive<\/td>236.8<\/td>118.9<\/td>Qualifier<\/td><\/tr>\n
5.<\/td>Methyl parathion<\/a><\/td>8.2<\/td>Positive<\/td>263.0<\/td>109.0<\/td>Quantifier<\/td><\/tr>\n
6.<\/td>Methyl parathion<\/a><\/td>8.2<\/td>Positive<\/td>263.0<\/td>79.0<\/td>Qualifier<\/td><\/tr>\n
7.<\/td>Captan<\/a><\/td>9.1<\/td>Positive<\/td>184.0<\/td>149.1<\/td>Quantifier<\/td><\/tr>\n
8.<\/td>Captan<\/a><\/td>9.1<\/td>Positive<\/td>184.0<\/td>134.1<\/td>Qualifier<\/td><\/tr>\n
9.<\/td>trans-Chlordane<\/a><\/td>9.1<\/td>Positive<\/td>271.9<\/td>237.0<\/td>Quantifier<\/td><\/tr>\n
10.<\/td>trans-Chlordane<\/a><\/td>9.1<\/td>Positive<\/td>372.9<\/td>265.9<\/td>Qualifier<\/td><\/tr>\n
11.<\/td>cis-Chlordane<\/a><\/td>9.3<\/td>Positive<\/td>372.9<\/td>265.9<\/td>Quantifier<\/td><\/tr>\n
12.<\/td>cis-Chlordane<\/a><\/td>9.3<\/td>Positive<\/td>271.9<\/td>237.0<\/td>Qualifier<\/td><\/tr>\n
13.<\/td>Chlorfenapyr<\/a><\/td>9.5<\/td>Positive<\/td>247.1<\/td>227.1<\/td>Quantifier<\/td><\/tr>\n
14.<\/td>Chlorfenapyr<\/a><\/td>9.5<\/td>Positive<\/td>59.1<\/td>31.1<\/td>Qualifier<\/td><\/tr>\n
15.<\/td>Cyfluthrin<\/a><\/td>11.5<\/td>Positive<\/td>163.0<\/td>127.1<\/td>Quantifier<\/td><\/tr>\n
16.<\/td>Cyfluthrin<\/a><\/td>11.5<\/td>Positive<\/td>199.1<\/td>170.1<\/td>Qualifier<\/td><\/tr>\n
17.<\/td>Cypermethrin<\/a><\/td>11.7<\/td>Positive<\/td>163.0<\/td>127.1<\/td>Quantifier<\/td><\/tr>\n
18.<\/td>Cypermethrin<\/a><\/td>11.7<\/td>Positive<\/td>181.1<\/td>152.1<\/td>Qualifier<\/td><\/tr>\n<\/tbody><\/table><\/div>

Conditions<\/h4>
Column<\/th>Rxi-5ms, 30 m, 0.25 mm ID, 0.25 \u00b5m (cat.# 13423<\/a>)<\/td><\/tr>
Standard\/Sample<\/th><\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #1 (cat.# 34124<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #2 (cat.# 34125<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #3 (cat.# 34126<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #4 (cat.# 34127<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #5 (cat.# 34128<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>California pesticide standard #6 (cat.# 34129<\/a>)<\/td><\/tr>
<\/td>Atrazine-d5 (cat.# 31984<\/a>)<\/td><\/tr>\n
Diluent:<\/th>Acetonitrile <\/td><\/tr>
Conc.:<\/th>5-7.5 ng\/mL Expected concentration range in extract after extracting from brownie fortified at 100 ng\/g (final extract was diluted in half with acetonitrile).<\/td><\/tr>
Injection<\/th><\/td><\/tr>
Inj. Vol.:<\/th>1 \u00b5L splitless<\/td><\/tr>
Liner:<\/th>Topaz 4.0 mm ID single taper inlet liner w\/wool (cat.# 23447<\/a>)<\/td><\/tr>
Inj. Temp.:<\/th>250 \u00b0C<\/td><\/tr>
Purge Flow:<\/th>5 mL\/min<\/td><\/tr>
Oven<\/td><\/tr>
Oven Temp.:<\/th>90 °C (hold 1 min) to 310 °C at 25 °C\/min (hold 10 min)<\/td><\/tr>
Carrier Gas<\/th>He, constant flow<\/td><\/tr>
Flow Rate:<\/th>1.4 mL\/min<\/td><\/tr><\/table>
Detector<\/th>MS\/MS<\/td><\/tr>
Transfer Line Temp.:<\/th>290 \u00b0C<\/td><\/tr>
Analyzer Type:<\/th>Quadrupole <\/td><\/tr>
Source Temp.:<\/th>330 \u00b0C<\/td><\/tr>
Electron Energy:<\/th>70 eV<\/td><\/tr>
Tune Type:<\/th>PFTBA <\/td><\/tr>
Ionization Mode:<\/th>EI <\/td><\/tr>
Instrument<\/th>Thermo Scientific TSQ 8000 Triple Quadrupole GC-MS<\/td><\/tr>
Sample Preparation<\/th>Brownies were pulverized using a SPEX Freezer\/Mill grinder and 0.5 g samples were fortified with pesticides and mycotoxins at 100 ng\/g. A mix of internal standards was added at 200 ng\/g. 1.5 mL of acetonitrile acidified with 1% acetic acid was added to the sample. The sample was vortexed and sonicated for 5 min, then the supernatant was passed through a 100 mg Resprep SPE C18 cartridge (cat.# 26030<\/a>). An additional 1.5 mL of extraction solvent (acidified acetonitrile) was added to the sample pellet, and the sample was vortexed again. The supernatant was passed through the same C18 cartridge. After reserving 750 \u03bcL for LC-MS analysis, the remaining supernatant was transferred to a Q-sep QuEChERS dSPE tube containing pre-weighed magnesium sulfate and PSA (cat.# 26215<\/a>). After vortexing and centrifuging, 500 \u03bcL of extract was mixed with 500 \u03bcL of acidified acetonitrile. 1 \u03bcL of final extract was injected into the GC-MS\/MS system.<\/td><\/tr><\/table><\/div><\/div><\/div>
<\/path><\/g><\/path><\/g><\/svg>Download PDF<\/a><\/div><\/div><\/div>\n<\/div><\/div><\/div>\n\n\n
<\/div>\n\n\n\n

Considerazioni sullo sviluppo del metodo: ottimizzazione della preparazione del campione<\/h3>\n\n\n\n

Dato che la nostra lista di composti target comprende un\u2019ampia gamma di analiti con polarit\u00e0 e caratteristiche fisiche e chimiche diverse, per la preparazione del campione \u00e8 essenziale adottare una metodologia non selettiva e garantire inoltre l\u2019efficace eliminazione delle maggiori interferenze senza alcuna perdita degli analiti target. Abbiamo utilizzato l’acetonitrile, il solvente di estrazione utilizzato tradizionalmente nei metodi QuEChERS, perch\u00e9 consente di recuperare una vasta gamma di composti polari e non polari. Inizialmente abbiamo condotto prove sperimentali utilizzando 1 g di campione e almeno 5 mL di acetonitrile per ogni estrazione. Tuttavia, riducendo la dimensione del campione a 0,5 g, siamo riusciti ad abbassare il volume del solvente di estrazione a 3 mL per ciascun campione, pur nel rispetto delle norme californiane. Contenere gli sprechi di solvente rende pi\u00f9 ecologiche le pratiche analitiche adottate e consente di diminuire i costi associati all\u2019analisi del campione e allo smaltimento dei rifiuti. Alla luce di questi vantaggi, per i successivi esperimenti di ottimizzazione sono stati utilizzati campioni da 0,5 g e acetonitrile come solvente di estrazione.<\/p>\n\n\n\n

Tra tutti gli analiti target, il daminozide \u00e8 uno dei pi\u00f9 complicati ed \u00e8 stato necessario adeguare ulteriormente la procedura di estrazione per l\u2019analisi di questo pesticida. Il daminozide \u00e8 altamente polare (log P = -1,5), quindi \u00e8 difficile da estrarre completamente dalla matrice di brownie, e non viene trattenuto facilmente in condizioni di fase inversa. Inoltre, i composti a basso peso molecolare, quali il daminozide, sono pi\u00f9 soggetti a interferenze e a un elevato rumore di fondo quando si utilizza MS, soprattutto in caso di scarsa ritenzione cromatografica. Sono state testate diverse strategie per aumentare il recupero di daminozide in condizioni che fossero favorevoli anche per gli altri analiti target.<\/p>\n\n\n\n

L\u2019acidificazione del solvente di estrazione \u00e8 stato il primo parametro valutato. A tal fine abbiamo confrontato l\u2019effetto derivante dell\u2019utilizzo dell\u2019acetonitrile con acido acetico (AA) all\u20191% (v\/v) rispetto all\u2019estrazione con acetonitrile puro. La Figura 3 mostra i risultati relativi ai composti target che hanno presentato una differenza di almeno il 40% tra i trattamenti. In caso di estrazione con acetonitrile acidificato, la risposta relativa del daminozide \u00e8 aumentata di circa l\u201980%, mentre la spiroxamine e l\u2019ochratoxin A hanno mostrato rispettivamente un miglioramento della risposta del 45% e 47%. Sulla scorta di quanto emerso e del fatto che nessuno dei composti target ha mostrato una diminuzione significativa della risposta, abbiamo utilizzato acetonitrile con acido acetico all’1% come solvente di estrazione nel nostro flusso di lavoro finale per la preparazione del campione. Ci\u00f2 offre un ulteriore vantaggio in quanto l\u2019acidificazione degli estratti previene la degradazione del captan, un pesticida adatto all\u2019analisi GC-MS\/MS che si degrada facilmente a valori di pH neutri o elevati [2].<\/p>\n\n\n\n

Il secondo parametro per la preparazione del campione che abbiamo esaminato \u00e8 stato l\u2019utilizzo di un\u2019unica estrazione da 3 mL rispetto a un\u2019estrazione in due fasi (da 1,5 mL cadauna). La Figura 4 riassume i risultati relativi agli analiti che hanno mostrato differenze statistiche (test t, valore p <0,05 a un livello di confidenza del 95%) tra le due condizioni di estrazioni (in entrambi i casi \u00e8 stato utilizzato acetonitrile acidificato). \u00c8 interessante notare che il daminozide ha mostrato il miglioramento pi\u00f9 significativo, con un aumento del 40% nella risposta relativa. Gli altri analiti indicati nella figura hanno mostrato un miglioramento della risposta tra il 10 e il 20%. L\u2019aumento delle risposte relative qui riscontrato con l\u2019utilizzo di una seconda fase di estrazione dovrebbe comportare recuperi di estrazione del campione pi\u00f9 elevati in campioni reali. Dato che questo effetto dipende da analita, matrice e solvente di estrazione, si raccomanda di effettuare sempre una valutazione alle condizioni sperimentali desiderate.Dopo l\u2019estrazione con acetonitrile acidificato tutti i campioni sono stati sottoposti a una semplice fase di purificazione con cartucce SPE C18 per rimuovere le interferenze idrofobiche pi\u00f9 significative co-estratte dai brownie. Dopodich\u00e9, i campioni per l\u2019analisi LC-MS\/MS e GC-MS\/MS sono stati trattati in modo diverso. I campioni LC-MS\/MS sono stati diluiti in acqua e centrifugati, rendendo possibile la separazione dei lipidi rimanenti che non erano stati trattenuti nella cartuccia SPE in quanto meno solubili nell\u2019estratto finale una volta aggiunta l\u2019acqua. I campioni GC-MS\/MS sono stati sottoposti a purificazione dSPE con solfato di magnesio e ammina primaria e secondaria (PSA) per rimuovere umidit\u00e0 e zuccheri prima dell\u2019analisi. Si noti che la PSA pu\u00f2 legarsi solo a pesticidi come il daminozide e la spiroxamine, quindi la procedura dSPE \u00e8 stata condotta solo sui pesticidi soggetti a GC.<\/p>\n\n\n

Figura 3:<\/strong>\u00a0Effetto dell\u2019acidificazione del solvente di estrazione (n=3). Le barre di errore rappresentano le deviazioni standard.<\/div>
\n